使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 传染性造血器官坏死病毒(IHNV)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64369
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使���应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
比阿娄维扎青霉 磷酸化特异性蛋白酪氨酸激酶抗体Human PKD2L1 ELISA Kit因子信号转导抑制因子1(SOCS-1)ELISA试剂盒
枯草芽孢杆菌膜相关蛋白酪氨酸激酶Lyn抗体Human PIWIL2 ELISA Kit纤维连接蛋白(cFn)ELISA试剂盒
黑腐皮壳磷酸化膜相关蛋白酪氨酸激酶Lyn抗体Human PIP5K1A ELISA Kit外基质磷酸糖蛋白(MEPE)ELISA试剂盒
解脂假丝酵母磷酸化膜相关蛋白酪氨酸激酶Lyn抗体Human PJA1 ELISA Kit色素P450c21B/21-羟化酶(CYP21B)ELISA试剂盒
洛格酵母脑瘤相关基因抗体Human PIP5K1B ELISA Kit色素P450c21A/21-羟化酶(CYP21A)ELISA试剂盒
香菇大脑边缘系统相关膜蛋白抗体Human PIP5K3 ELISA Kit色素P450(CYP450)ELISA试剂盒
相思根瘤菌神经突触粘附样分子1抗体Human PIP5KL1 ELISA Kit色素c氧化酶Ⅵα亚基多肽1(COX6A1)ELISA试剂盒
大肠埃希氏杆菌富含亮氨酸重复序列/Ⅲ型纤维连接蛋白4抗体Human PITPNA ELISA Kit色素C氧化酶(COX)ELISA试剂盒
球孢白僵菌层粘蛋白α4抗体(Lamininα4)Human PIR ELISA Kit色素C-1(CYC1)ELISA试剂盒
酿酒酵母层粘蛋白α4抗体(Lamininα4)Human PITPNB ELISA Kit色素C(Cyt-C)ELISA试剂盒
链霉菌 (灰褐类群)脂质运载蛋白1抗体Human PIGT ELISA Kit色素b561(cytb561)ELISA试剂盒
天蓝色链霉菌趋化因子抗体Human PIGS ELISA Kit绒毛蛋白/埃兹蛋白(cytovillin/ezrin)ELISA试剂盒
产氨短杆菌低密度脂蛋白受体5样蛋白抗体Human PIGZ ELISA Kit绒毛蛋白/埃兹蛋白(CVL)ELISA试剂盒
根瘤菌富含亮氨酸重复跨膜神经元蛋白3抗体Human PIH1D1 ELISA Kit膜表面球蛋白(SmIg)ELISA试剂盒
单色革盖菌扁豆凝集素Human PIK3C2G ELISA Kit膜DNA抗体(cmDNA)ELISA试剂盒
卷枝毛霉磷酸化富亮氨酸重复激酶2抗体Human IL20RA(Interleukin-20 receptor subunit alpha) ELISA Kit角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)ELISA试剂盒
传染性造血器官坏死病毒(IHNV)检测试剂盒(荧光-PCR法)硝唑偶联血蓝蛋白穿山龙(标准品)Human
三聚与鸡卵白蛋白偶联物穿心莲(标准品)Human, Mouse
神经元特异性烯化酶抗原穿心莲内酯(标准品)Human, Mouse, Rat
Nogo-66 (1-40)船形乌头(标准品)Human
神经肽 Y(1-36)垂盆草(标准品)Human, Mouse, Rat
神经保护肽椿皮(标准品)Human
神经丝蛋白蛋白多肽慈溪麦冬皂苷AHuman
土霉素偶联牛血清白蛋白次野鸢尾黄素(标准品)Human, Mouse
土霉素偶联鸡卵白蛋白甘草查尔(标准品)Human, Mouse
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。