使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 罗湖病毒(TiLV)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64371
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
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PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模��的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
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PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
蜡状芽孢杆菌促脂素gamma抗体Human PIGB ELISA Kit凋亡相关斑点样蛋白(PYCARD)ELISA试剂盒
细链格孢核纤层蛋白B受体抗体Human PI3K p55(gamma) ELISA Kit系统性红斑狼疮(SLE)ELISA试剂盒
美澳型核果褐腐病菌长寿相关基因lASS1抗体Human KLB(Beta-klotho) ELISA Kit烯化酶(NSE)ELISA试剂盒
苏云金芽孢杆菌长寿相关基因lASS6抗体Human PI4K2A ELISA Kit硒结合蛋白1(SELENBP1)ELISA试剂盒
弗吉尼亚链霉菌长寿相关基因lASS5抗体Human PIGK ELISA Kit硒蛋白S(SELS)ELISA试剂盒
拟茎点霉属长寿相关基因lASS3抗体Human PIGM ELISA Kit硒蛋白P(SEPP1)ELISA试剂盒
橙色嗜热子囊菌肿瘤转移抑制基因1抗体Human PHKA1 ELISA Kit硒蛋白1(SEP1)ELISA试剂盒
锗栓孔菌长寿相关基因lASS4抗体Human PHIP ELISA Kit戊糖素(Pentosidine)ELISA试剂盒
米曲霉RNA结合蛋白LIN28B抗体Human PHKA2 ELISA Kit舞蹈病蛋白相互作用蛋白1(HIP1)ELISA试剂盒
戊糖片球菌RNA结合蛋白LIN28抗体Human PHKB ELISA Kit五聚素3(PTX3)ELISA试剂盒
单增李斯特氏菌内皮脂肪酶抗体Human AMACR(Alpha-methylacyl-CoA racemase) ELISA Kit无花果酶2(FCN2)ELISA试剂盒
枯草芽孢杆菌抗原6G抗体Human PHKG1 ELISA Kit乌头酸酶2(ACO-2)ELISA试剂盒
果生链核盘菌富含亮氨酸胶质瘤失活蛋白1抗体Human PHKG2 ELISA Kit蜗牛同源物2(SNAI2)ELISA试剂盒
美澳型核果褐腐病菌层粘连蛋白5(laminin γ2)抗体Human PHLDA1 ELISA Kit蜗牛同源物1(果蝇)样1蛋白(SNAIL1)ELISA试剂盒
凝结芽胞杆菌唾液过氧化物酶LPO抗体Human PHLPP ELISA Kit胃粘液素(GM)ELISA试剂盒
短小芽孢杆菌溶菌酶抗体Human PHLDA2 ELISA Kit胃粘膜相关样组织瘤抗体(MALT Lymphoma Ab)ELISA试剂盒
罗湖病毒(TiLV)检测试剂盒(荧光-PCR法)小鼠B**瘤因子2薯蓣皂素;薯蓣皂苷元(标准品)Human, Mouse, Rat
大鼠铁蛋白双氢(标准品)Human
大鼠补体片断C1q植提标准品Human
大鼠碳酐酶2双去氧姜黄素Human, Mouse
小鼠CXC趋化因子受体3双去氧姜黄素(标准品)Human
人神经丝蛋白双(标准品)Human, Mouse
人**肽水防风(标准品)Human, Mouse
大鼠色素上皮衍生因子水飞蓟宾(标准品)Human, Mouse, Rat
小鼠肿瘤特异生长因子/肿瘤相关因子水飞蓟宁Human, Mouse, Rat
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。