使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 沙门氏菌(SPP)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64379
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
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PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
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PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
乳杆菌属浅表层粘膜蛋白多糖抗体Human PCDH9 ELISA Kit羰基化蛋白(PC)ELISA试剂盒
戊糖乳杆菌调控胚胎干分化蛋白Lhx2抗体Human PCDHA2 ELISA Kit羰基还原酶[NADPH] 1(CBR1/CBR/CRN)ELISA试剂盒
马红球菌LRRC2蛋白抗体Human PBXIP1 ELISA Kit碳酸酐酶9(CA9)ELISA试剂盒
微小根毛霉神经突触蛋白NGL3抗体Human PCBD1 ELISA Kit碳酸酐酶6(CA-6)ELISA试剂盒
蝉花1-13(可订)致盲基因LCA5样蛋白抗体Human PCDHGC3 ELISA Kit碳酸酐酶3(CA3)ELISA试剂盒
肺形侧耳(凤尾菇)致盲基因LCA5蛋白抗体Human PCF11 ELISA Kit碳酸酐酶2(CA-2)ELISA试剂盒
假单胞菌属转录因子LHX6抗体Human PCBD2 ELISA Kit碳酸酐酶2(CA2)ELISA试剂盒
绒盖干酪菌磷酸化肿瘤抑制基因LATS1/LATS2抗体Human PCBP2 ELISA Kit碳酸酐酶12(CA-12)ELISA试剂盒
扬奇青霉转录因子LBX1抗体Human ICTP(Cross-linked C-terminal opeptide of Collagen alpha-1(I) chain) ELISA Kit碳酸酐酶(CA)ELISA试剂盒
里氏木霉神经特异性转录因子LDB1抗体Human PCDH11Y ELISA Kit肽-主要组织相容性复合体复合物(pMHC)ELISA试剂盒
香菇白化学吸引素2抗体Human PCDH11X ELISA Kit肽酰脯氨酰异构酶(亲环蛋白)样1(PPIL1)ELISA试剂盒
嗜线虫致病杆菌LHX5蛋白抗体Human PCDHA3 ELISA Kit肽聚糖识别蛋白L(PGRP-L)ELISA试剂盒
松口蘑单丝氨酸蛋白激酶1+2抗体Human PCDHA2 ELISA Kit肽聚糖(PG)ELISA试剂盒
人参土地杆菌LIN7C蛋白抗体Human PCDH9 ELISA Kit肽基脯氨酰顺反异构酶(PPI)ELISA试剂盒
富含亮氨酸重复序列Nogo受体反应蛋白4抗体Human PCDHGB3 ELISA Kit胎球蛋白A(Fetuin A)ELISA试剂盒
地衣芽孢杆菌富含亮氨酸α2糖蛋白抗体Human PBRM1 ELISA Kit胎球蛋白A(FETU-A)ELISA试剂盒
沙门氏菌(SPP)检测试剂盒(荧光-PCR法)小鼠补体蛋白4浙贝母(标准品)Human, Mouse, Rat
小鼠素鹧鸪菜(标准品)Human
大鼠热休克蛋白40珍珠(标准品)Human, Mouse
人天门冬氨转氨酶/谷草转氨酶珍珠母(标准品)Human, Mouse
大鼠热休克蛋白20正丁苯酞;丁酞内酯(标准品)Human
人肝脂酶正二十九烷Human, Mouse
小鼠α2抗纤溶酶芝麻林素(标准品)Human, Mouse
小鼠α2纤溶酶抑制物芝麻素(标准品)Human, Mouse, Rat
人乙酰肝素酶知母(标准品)Human, Mouse, Rat
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。