使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 鼠疫杆菌(YP)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64384
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
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PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
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PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
鲍鱼侧耳层粘蛋白α2抗体Human p35 ELISA Kit水通道蛋白0(AQP-0)ELISA试剂盒
冷海水黄杆菌内皮脂肪酶抗体Human OXER1 ELISA Kit双氢睾酮(DHT)ELISA试剂盒
短密青霉可溶性凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1抗体Human OXCT2 ELISA Kit衰变加速因子(DAF/CD55)ELISA试剂盒
鞘氨单胞菌属层粘连蛋白β2抗体Human p35 ELISA Kit鼠嗜酸粒趋化因子(ECF)ELISA试剂盒
锥形赤褶菇白衍生化学吸引素抗体Human P4HA3 ELISA Kit瘦素受体(LeptinR)ELISA试剂盒
猪丹丝菌T易位蛋白2抗体Human OXER1 ELISA Kit瘦素受体(LEPR)ELISA试剂盒
越南芽孢杆菌酪氨酸磷酸酶受体相互作用蛋白Liprin α1抗体Human OTOP3 ELISA Kit瘦素(Leptin)ELISA试剂盒
红缘层孔菌线粒体离子肽酶1抗体Human OTOR ELISA Kit瘦素(LEP)ELISA试剂盒
平田头菇10-4微管相关蛋白轻链3C抗体Human P4HA3 ELISA Kit受体型酪氨酸蛋白磷酸酶样N(PTPRN)ELISA试剂盒
大肠埃希菌假定肿瘤抑制亮氨酸拉链蛋白1抗体Human USO1(Protein USO1 homolog) ELISA Kit受体酪氨酸激酶(RTKs)ELISA试剂盒
嗜酸乳杆菌乳酸脱氢酶LDH-C(肿瘤/抗原32)抗体Human p130Cas ELISA Kit受体TNFRSF结合丝氨酸苏氨酸激酶2(RIPK2)ELISA试剂盒
高卢蜜环菌肿瘤抑制基因LUCA15抗体Human p150 glued ELISA Kit受磷蛋白(PLN)ELISA试剂盒
黑根霉特异性转运蛋白1抗体Human P15RS ELISA Kit嗜伊红颗粒主要碱性蛋白(EMBP/MBP)ELISA试剂盒
聚生壳菌RNA聚合酶相关蛋白LEO1抗体Human p19 INK4d ELISA Kit嗜酸性粒阳离子蛋白(ECP)ELISA试剂盒
枯草芽孢杆菌枯草亚种磷酸化低密度脂蛋白受体相关蛋白6抗体Human ACP5(TartRate-resistant acid phosphatase type 5) ELISA Kit嗜酸性白血球相关之RNA水解酵素家族成员3(EAR3)ELISA试剂盒
沃氏富盐菌磷酸化特异性蛋白酪氨酸激酶抗体Human OVCA2 ELISA Kit嗜酸性白血球相关之RNA水解酵素家族成员2(EAR2)ELISA试剂盒
鼠疫杆菌(YP)检测试剂盒(荧光-PCR法)小鼠还原型谷胱甘肽雷酚内酯(标准品)Human, Mouse, Rat
植物吲哚乙雷公藤春Human
大鼠可溶性白介素6受体雷公藤次(标准品)Human
兔可溶性凋亡相关因子雷公藤定Human, Mouse, Rat
人肿瘤坏死因子相关激活诱导因子雷公藤红素(标准品)Human
兔6前列腺素F1a雷公藤素(标准品)Human, Mouse, Rat
小鼠肌钙蛋白T雷公藤晋Human, Mouse
大鼠吡啶酚雷公藤内酯(标准品)Human, Mouse, Rat
麦胚凝集素/凝集蛋白雷公藤内酯(标准品)Human, Mouse
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。