使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: A 族链球菌(GAS)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64397
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
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PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的���基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
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PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
草花忍冬叶点霉拟南芥MAP65蛋白抗体Human NEK3 ELISA Kit羟基赖正己氨酸(HLNL)ELISA试剂盒
氨菌素链霉菌神经干RNA结合蛋白Musashi1抗体Human NDUFB8 ELISA Kit羟基胶原吡啶交联(OH-PYD)ELISA试剂盒
大肠埃希氏菌粘膜粘附分子1抗体Human NDUFB9 ELISA Kit强啡肽(Dyn)ELISA试剂盒
酿酒酵母髓过氧化物酶抗体Human NDUFC2 ELISA Kit潜伏转化生长因子β结合蛋白2(LTBP2)ELISA试剂盒
土曲霉膜相关鸟苷酸反转激酶1抗体Human NDUFS1 ELISA Kit潜伏膜蛋白1(LMP-1)ELISA试剂盒
长枝木霉神经突触前膜胞内蛋白13抗体Human NDUFS5 ELISA Kit前心钠肽(Pro-ANP)ELISA试剂盒
冻土毛霉高度保守基因相关蛋白Membralin抗体Human NDUFS3 ELISA Kit前铁调素(Pro-Hepc)ELISA试剂盒
酿酒酵母运动神经元及胰腺同源蛋白1抗体Human NDUFS6 ELISA Kit前列腺特异性抗原(PSA)ELISA试剂盒
副猪嗜血杆菌少突胶质髓鞘相关蛋白抗体Human NDUFV1 ELISA Kit前列腺酸性磷酸酶(PAP)ELISA试剂盒
强壮类芽孢杆菌CDC42结合蛋白激酶α抗体(MRCKα)Human NDUFV2 ELISA Kit前列腺素H2(PGH2)ELISA试剂盒
费希尔曲霉髓样分化蛋白抗体Human SERPINF1(Pigment epithelium-derived factor) ELISA Kit前列腺素F2α(PGF2α)ELISA试剂盒
酿酒酵母外周髓磷脂P0蛋白/P0蛋白抗体Human NDUFV3 ELISA Kit前列腺素F(PGF)ELISA试剂盒
栗疫菌褪黑素受体1A/松果体素受体1A抗体Human NDRG2(N-myc downstream-regulated gene 2 protein) ELISA Kit前列腺素E2(PGE2)ELISA试剂盒
米曲霉肌**素抗体Human NDUFB5 ELISA Kit前列腺素E1(PGE1)ELISA试剂盒
J53大肠磷酸化髓鞘转录因子1抗体Human NDUFA4L2 ELISA Kit前列腺素D合成酶(PTGDS)ELISA试剂盒
多孢霉DNA损伤关键蛋白Mre11抗体Human NDUFA3 ELISA Kit前列腺素D合成酶(PGDS)ELISA试剂盒
A 族链球菌(GAS)检测试剂盒(荧光-PCR法)小鼠脑源性神经营养因子化两面针(标准品)Human, Mouse, Rat
人可溶性因子受体化木兰花(标准品)Human, Mouse, Rat
人可溶性凋亡相关因子配体化矢车菊素,花青素(标准品)Human, Mouse, Rat
植物维生素B6化缬草素Human, Mouse
兔质金属蛋白酶1化血根(标准品)Human
小鼠骨成型蛋白2轮环藤根(标准品)Human, Mouse
大鼠热休克蛋白47罗布麻宁;香草乙;夹竹桃麻素(标准品)Human, Mouse
人凋亡抑制因子罗布麻叶(标准品)Human
小鼠骨成型蛋白4罗汉果(标准品)Human
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。