使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 猩红热链球菌(SS)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64421
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
樟疫霉粘蛋白-2/上皮膜抗原2抗体Human RGS3(Regulator of G-protein signaling 3) ELISA Kit人抗增殖核抗原抗体(PCNA)ELISA试剂盒
贝伦格勒座腔菌梨专化型粘蛋白4抗体Human RGS10(Regulator of G-protein signaling 10) ELISA Kit人抗载脂蛋白抗体A1(Apo A1)ELISA试剂盒
酿酒酵母v-maf 肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A抗体Human HMGB4(High mobility group protein B4) ELISA Kit人抗原提呈相关转运蛋白/T活化蛋白(TAP)ELISA试剂盒
Phoma medicaginis var. medicaginis基质金属蛋白酶-10抗体Human PENK(Proenkephalin-A) ELISA Kit人抗硬皮病抗体70(SCL70/topoⅠ)ELISA试剂盒
松乳菇突变型P53抗体Human RGS10(Regulator of G-protein signaling 10) ELISA Kit人抗异质型核糖核蛋白抗体/抗RA33抗体(anti-hnRNP-ab/anti-RA33-ab)ELISA试剂盒
黄盖蜜环菌蜜蜂微孢子虫蛋白抗体Human ARSA(Arylsulfatase A) ELISA Kit人抗胰岛素受体抗体(AIRA)ELISA试剂盒
粉状毕赤氏酵母基质金属蛋白酶-24抗体Human HMGB4(High mobility group protein B4) ELISA Kit人抗胰蛋白酶(AT)ELISA试剂盒
黑络丸巨噬甘露糖受体抗体Human RGS3(Regulator of G-protein signaling 3) ELISA Kit人抗眼肌抗体(EMAb)ELISA试剂盒
酿酒酵母胃粘液素抗体Human ATOH1(Protein atonal homolog 1) ELISA Kit人抗血小板抗体IgM(PA-IgM)ELISA试剂盒
枯草芽孢杆菌基质金属蛋白酶20抗体Human KLF14(Krueppel-like factor 14) ELISA Kit人抗血小板抗体IgG/M/A(PA-IgG/M/A)ELISA试剂盒
平脐蠕孢菌尿调节蛋白抗体Human MYH9(Myosin-9) ELISA Kit人抗血小板抗体IgG(PA-IgG)ELISA试剂盒
根瘤菌肌增强因子2抗体Human AMSH(alpha-MSH) ELISA Kit人抗血小板抗体IgA(PA-IgA)ELISA试剂盒
枯草芽孢杆菌肌原调节蛋白抗体Human PRSS2(Trypsin-2) ELISA Kit人抗血小板抗体(anti-PA Ab)ELISA试剂盒
越南芽孢杆菌神经母特异性转移因子抗体Human IL17RB(Interleukin-17 receptor B) ELISA Kit人抗胸腺球蛋白(ATG)ELISA试剂盒
酿酒酵母组织相关抗原HLA-B15抗体Human CDO1(Cysteine dioxygenase type 1) ELISA Kit人抗信号识别颗粒抗体(SRP)ELISA试剂盒
Gordonia蛋氨酸腺苷转移酶抗体Human CYP2D6(Cytochrome P450 2D6) ELISA Kit人抗心磷脂抗体IgM(ACA-IgM)ELISA试剂盒
猩红热链球菌(SS)检测试剂盒(荧光-PCR法)小鼠肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ升麻素苷(标准品)Human, Mouse
人抑制素升麻-3-O-α-L-拉伯糖苷(标准品)Human, Mouse
人神经元凋亡抑制蛋白生脉提取物(标准品)Human, Mouse, Rat
小鼠肿瘤坏死因子α胜红蓟(标准品)Human, Mouse, Rat
大鼠B**瘤因子2圣草次苷(标准品)Human, Mouse
大鼠CXC趋化因子受体3圣草酚(标准品)Human, Mouse
小鼠肿瘤坏死因子β蓍草(标准品)Human
人食欲素/阿立新B十七碳酯(标准品)Human
小鼠Ⅳ型胶原石菖蒲(标准品)Human, Mouse
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。