使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 恙虫病东方体(OT)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64423
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
芽孢杆菌属胃动素抗体Human CAV1(Caveolin-1) ELISA Kit人抗糖蛋白抗体(GP)ELISA试剂盒
酿酒酵母甘露聚糖结合凝集素抗体Human MYH9(Myosin-9) ELISA Kit人抗髓鞘相关糖蛋白抗体(MAG Ab)ELISA试剂盒
双孢菇膜相关环指蛋白11抗体Human AMSH(alpha-MSH) ELISA Kit人抗髓磷脂抗体IgA(anti-myelin Ab)ELISA试剂盒
异常威克汉姆酵母结核分枝杆菌Ag85B抗体Human SERPINA6(Corticosteroid-binding globulin) ELISA Kit人抗髓磷脂抗体IgA(AMA IgA)ELISA试剂盒
大肠埃希菌磷酸化微管相关蛋白4抗体Human IL17RB(Interleukin-17 receptor B) ELISA Kit人抗双链DNA抗体/天然DNA抗体(dsDNA)ELISA试剂盒
球孢白僵菌磷酸化微管相关蛋白4抗体Human NR1H2(Oxysterols receptor LXR-beta) ELISA Kit人抗鼠抗体(HAMA)ELISA试剂盒
类布氏乳杆菌人水痘带状疱疹病gE蛋白抗体Human UBR4(E3 ubiquitin-protein ligase UBR4) ELISA Kit人抗嗜中性粒胞浆抗体(ANCA)ELISA试剂盒
矿泉水 钙、镁、、钠、锶、硒、偏硅酸 黑色素瘤相关抗原G1/肝癌相关蛋白4抗体Human CRYAB(Alpha-crystallin B chain) ELISA Kit人抗肾小球基底膜抗体(GBM)ELISA试剂盒
栗疫菌黑色素瘤相关抗原B6抗体Human GLB1(Beta-galactosidase) ELISA Kit人抗肾小管基底膜抗体(TBM)ELISA试剂盒
巴氏醋杆菌黑色素瘤相关抗原C2抗体Human CAV1(Caveolin-1) ELISA Kit人抗肾上腺皮质抗体(AAA)ELISA试剂盒
酿酒酵母黑色素瘤抗原样基因2抗体Human HPR(Haptoglobin-related protein) ELISA Kit人抗神经元核抗体2型/抗Ri抗体(ANNA-2/Ri)ELISA试剂盒
假交替单孢菌黑色素瘤相关抗原C1抗体Human TALDO1(Transaldolase) ELISA Kit人抗神经元核抗体1型/抗Hu抗体(ANNA-1/Hu)ELISA试剂盒
日本慢生根瘤菌黑色素瘤相关抗原B2抗体Human PSG3(Pregnancy-specific beta-1-glycoprotein 3) ELISA Kit人抗神经节苷脂抗体(GM1)ELISA试剂盒
运动节杆菌黑色素瘤相关抗原B4抗体Human FABP4(Fatty acid-binding protein, adipocyte) ELISA Kit人抗通透性增高蛋白抗体(BPI-Ab)ELISA试剂盒
乡间布丘氏菌组蛋白乙酰转移酶抗体(脑膜瘤表达抗原5)Human ELANE(Neutrophil elastase) ELISA Kit人抗腮腺管抗体(anti-parotid duct Ab)ELISA试剂盒
叶点霉属磷酸化微管相关蛋白4抗体Human COL4A1(Collagen alpha-1(IV) chain) ELISA Kit人抗软骨抗体(anti-cartilage-Ab)ELISA试剂盒
恙虫病东方体(OT)检测试剂盒(荧光-PCR法)小鼠组织因子途径抑制物鸦胆子苦(标准品)Human, Mouse, Rat
大鼠脂蛋白脂酶鸦胆子素D(标准品)Human, Mouse, Rat
大鼠抗性磷酶5b鸭脚树叶(标准品)Human, Mouse
小鼠水通道蛋白5鸭跖草(标准品)Human, Mouse
人鼻咽癌亚硫氢钠穿心莲内酯(标准品)Human
小鼠水通道蛋白4亚麻木酚素(标准品)Human
大鼠葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽烟(标准品)Human
人膀胱癌抗原延胡索(元胡)(标准品)Human, Mouse
小鼠水通道蛋白3延胡索素(标准品)Human, Mouse, Rat
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。