使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 普氏立克次体(RP)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64424
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是���循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
盐古杆菌黑色素瘤相关抗原B3抗体Human NUCB2(Nucleobindin-2) ELISA Kit人抗人绒毛膜促性腺抗体(AhCGAb)ELISA试剂盒
布鲁氏菌 生物Ⅱ型锌指蛋白801抗体Human RLN3(Relaxin-3) ELISA Kit人抗染色体抗体(anti-chromosome Ab)ELISA试剂盒
中性弯曲嗜酸菌NDUFS2抗体Human IL5RA(Interleukin-5 receptor) ELISA Kit人抗浦肯野抗体/抗Yo抗体(PCA-1/Yo)ELISA试剂盒
产朊假丝酵母NDUFAF4抗体Human S100A16(Protein S100-A16) ELISA Kit人抗平滑肌抗体(ASMA)ELISA试剂盒
黑木耳分化相关基因NDRG1抗体Human ELANE(Neutrophil elastase) ELISA Kit人抗皮肤抗体(ASA)ELISA试剂盒
中慢生华癸根瘤菌神经降压素抗体Human RRM1(Ribonucleoside-diphosphate reductase large subunit) ELISA Kit人抗凝血素抗体(aPT1/aPT2)ELISA试剂盒
杀鲑气单胞菌核受体辅助抑制因子2抗体Human PSG3(Pregnancy-specific beta-1-glycoprotein 3) ELISA Kit人抗凝血酶受体(ATR)ELISA试剂盒
黄色短杆菌核仁磷酸蛋白抗体Human IL5RA(Interleukin-5 receptor) ELISA Kit人抗凝血酶III(AT III)ELISA试剂盒
大肠埃希氏菌嗜中性粒胞浆因子4抗体Human NUCB2(Nucleobindin-2) ELISA Kit人抗凝血酶Ⅲ抗体(AT-Ⅲ)ELISA试剂盒
蘑菇轮枝孢磷酸化核因子NF-κB p65抗体Human S100A16(Protein S100-A16) ELISA Kit人抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)ELISA试剂盒
*胜利油田热微球菌磷酸化一氧化氮合成酶3(内皮型)抗体Human RLN3(Relaxin-3) ELISA Kit人抗酿酒酵母抗体(ASCA)ELISA试剂盒
黑曲霉核抑制蛋白磷酸酶1抗体Human FABP4(Fatty acid-binding protein, adipocyte) ELISA Kit人抗内因子抗体(IFA)ELISA试剂盒
异配囊接霉NCK衔接蛋白1抗体Human IL9(Interleukin-9) ELISA Kit人抗内皮抗体(AECA)ELISA试剂盒
热带盐水孢菌α-中连蛋白抗体Human RRM1(Ribonucleoside-diphosphate reductase large subunit) ELISA Kit人抗脑组织抗体(ABAb)ELISA试剂盒
大肠杆菌核受体Rev-Erbα抗体Human LAMA1(Laminin subunit alpha-1) ELISA Kit人抗苗勒管(AMH)ELISA试剂盒
Wautersiella falsenii性受体NK-p44抗体Human PDGFRA(Alpha-type plaet-derived growth factor receptor) ELISA Kit人抗麦胶蛋白/麦溶蛋白抗体(AGA)ELISA试剂盒
普氏立克次体(RP)检测试剂盒(荧光-PCR法)锌指FYVE结构域蛋白27抗体脑二磷胆 CYTIDINE-5'-DIPHOSPHOCHOLINE(P)Human, Mouse, Rat
受精卵抑制蛋白1抗体脑二磷胆 CYTIDINE-5'-DIPHOSPHOCHOLINE(P)Human, Mouse, Rat
锌指蛋白471抗体豆苷 DAIDZIN(AS)Human, Mouse
γ-氨丁A受体相关膜蛋白3豆苷 DAIDZIN(AS)Human, Mouse
锌指蛋白909抗体豆苷 DAIDZIN(AS)Human, Mouse
锌指蛋白420抗体黄豆苷 DAIDZIN(P) (Compendial Traceable)Human
周期蛋白1结合蛋白抗体黄豆苷 DAIDZIN(P) (Compendial Traceable)Human, Mouse
锌指蛋白318抗体黄豆苷 DAIDZIN(P) (Compendial Traceable)Human
锌指蛋白281抗体黄豆苷 DAIDZIN(P) (Compendial Traceable)Human, Mouse
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。