使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种(KP)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64434
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
异常汉逊酵母异常变种一氧化氮合成酶-3(内皮型)抗体Human CNTF(Ciliary neurotrophic factor) ELISA Kit胶质系来源的神经营养因子(GDNF)ELISA试剂盒
白金针14孤菲肽受体/痛敏肽受体抗体Human FGF1(Heparin-binding growth factor 1) ELISA Kit胶原凝集素(Collectin)ELISA试剂盒
异常汉逊酵母钠转运体蛋白抗体Human FLT3(Receptor-type tyrosine-protein kinase FLT3) ELISA Kit胶原酶II(Collagenase II)ELISA试剂盒
相思根瘤菌P物质受体抗体Human IFNA1(Interferon alpha-1/13) ELISA Kit胶原酶I(Collagenase I)ELISA试剂盒
苏云金芽胞杆菌神经激肽B受体抗体Human 5-NT(5-Nucleotidase) ELISA Kit胶原蛋白Ⅱ(HCBⅡ)ELISA试剂盒
鸡伤寒沙门氏菌肿瘤转移抑制基因抗体Human AAA(Anti-Albumin Antibody) ELISA Kit胶原吡啶交联(PYD)ELISA试剂盒
腐皮壳肿瘤抑制基因抗体Human ABCC5(ATP Binding Cassette Transporter C5) ELISA Kit降脂素(Adipsin)ELISA试剂盒
棉子糖乳球菌肿瘤抑制基因抗体Human ABCG1(ATP Binding Cassette Transporter G1) ELISA Kit降解加速因子(DAF)ELISA试剂盒
产酸克雷伯氏菌孤菲肽/痛敏肽抗体Human AAHA(Anti-Apolipoprotein Antibody) ELISA Kit降钙素原(PCT)ELISA试剂盒
紫色红曲轴索过度生长抑制因子受体/Nogo受体抗体Human ACA-IgG(Anti-Cardiolipin Antibody IgG) ELISA Kit降钙素基因相关肽(CGRP)ELISA试剂盒
玉米黑粉菌神经元引导蛋白3抗体Human ACAT2(Acetyl Coenzyme A Acetyltransferase 2, cytosolic) ELISA Kit降钙素(CT)ELISA试剂盒
酿酒酵母性受体NK-p46抗体Human ACHAP(Acetylcholinesterase Associated Protein) ELISA Kit碱性胎儿蛋白(BFP)ELISA试剂盒
镰刀菌属神经组织特异性F肌动蛋白结合蛋白2抗体Human ACC(Acetyl-CoA Carboxylase) ELISA Kit碱性磷酸酶(ALP)ELISA试剂盒
枯草芽孢杆菌NYS48蛋白抗体Human IFNA1(Interferon alpha-1/13) ELISA Kit碱性亮氨酸拉链转录因子ATF样蛋白(BATF)ELISA试剂盒
杏鲍菇肌痉挛性癫痫病相关EPM2蛋白抗体Human FGF1(Heparin-binding growth factor 1) ELISA Kit碱性成纤维生长因子9(bFGF-9)ELISA试剂盒
灵芝非霍奇金瘤重复蛋白2抗体Human ANXA5(Annexin A5) ELISA Kit碱性成纤维生长因子6(bFGF-6)ELISA试剂盒
肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种(KP)检测试剂盒(荧光-PCR法)锌指蛋白913抗体环阿屯 CYCLOARTENOL(P)Human, Mouse, Rat
锌指蛋白450抗体环阿屯 CYCLOARTENOL(P)(REQUEST QUOTE)Human, Mouse, Rat
锌指蛋白20D3抗体松驰素 J CYTOCHALASIN J(RG)Human
锌指蛋白BED3抗体S- 烯别半胱氨,蒜氨 CYSTEINE, S-ALLYL-L-(P)Human, Rat
锌指蛋白ZBTB38抗体S- 烯别半胱氨,蒜氨 CYSTEINE, S-ALLYL-L-(P)Human, Mouse
锌结合乙脱氢酶结构域蛋白2抗体S- 烯别半胱氨,蒜氨 CYSTEINE, S-ALLYL-L-(RG)Human, Mouse
锌指蛋白ZBTB3抗体S- 烯别半胱氨,蒜氨 CYSTEINE, S-ALLYL-L-(RG)Human, Mouse, Rat
锌指蛋白ZBBX抗体S- 烯别半胱氨,蒜氨 CYSTEINE, S-ALLYL-L-(RG)Human, Mouse, Rat
锌指蛋白219抗体松驰素 H CYTOCHALASIN H(RG)Human, Mouse, Rat
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。