PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
产品参数:
产品名称: 钩端螺旋体(Lep)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64443
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
嗜热链球菌磷酸化谷氨酸受体1抗体Human MMP-9(Matrix Metalloproteinase 9) ELISA Kit红**素受体(EPOR)ELISA试剂盒
Aquibacillus halophilus磷酸化谷氨酸受体1抗体Human MYD88(Myeloid differentiation primary response protein MyD88) ELISA Kit红**素(EPO)ELISA试剂盒
角鳞灰鹅膏菌神经束蛋白186抗体Human KLK10/NES1(Kallikrein-10) ELISA Kit红膜蛋白(EMP)ELISA试剂盒
镰孢菌磷酸化泛素连接酶NEDD4-2抗体Human NGF/NGFβ(Beta-nerve growth factor) ELISA Kit红激因子(ESF)ELISA试剂盒
泡囊短波单胞菌磷酸化核因子p50/k基因结合核因子抗体Human NID-1(Nidogen-1/Entactin) ELISA Kit横纹肌辅肌动蛋白α(sm Actinin-α)ELISA试剂盒
溜曲霉磷酸化谷氨酸受体1抗体Human MFGE8(Lactadherin) ELISA Kit亨廷顿相关蛋白1(HAP1)ELISA试剂盒
酵母菌类固受体激活蛋白2抗体Human MMP-9(Matrix Metalloproteinase 9) ELISA Kit黑素瘤衍生亮氨酸拉链额外核因子(MLZE)ELISA试剂盒
紧密青霉胚胎干关键蛋白抗体Human MYD88(Myeloid differentiation primary response protein MyD88) ELISA Kit黑色素抗体(MC Ab)ELISA试剂盒
枯草芽孢杆菌核小体组装蛋白1抗体Human Mer/MERTK(Tyrosine-protein kinase Mer) ELISA Kit黑色素(MSH)ELISA试剂盒
葡萄座腔菌N-钙粘附分子抗体Human KLK10/NES1(Kallikrein-10) ELISA Kit黑色素浓缩(MCH)ELISA试剂盒
酿酒酵母核受体辅助抑制因子1抗体Human PIM-1(Serine/Threonine-protein Kinase Pim-1) ELISA Kit黑色素瘤转移表面黏附分子(MMSAM)ELISA试剂盒
单色革盖菌肾小球粘附分子受体抗体Human C-ERC(Mesothelin) ELISA Kit黑色素瘤相关抗原D4(MAGED4/MAGED4B)ELISA试剂盒
盐古杆菌巢蛋白/神经上皮干蛋白抗体Human KLK6(Kallikrein-6) ELISA Kit黑色素瘤活性抑制蛋白(MIA)ELISA试剂盒
蒂莫内马赛菌巢蛋白/神经上皮干蛋白抗体Human SERPINA4(Kallistatin) ELISA Kit黑色素瘤标记物(MART/Melan-A)ELISA试剂盒
黑芝蛋白激酶锚定蛋白抗体Human KIM-1(Kidney Injury Molecule 1) ELISA Kit核转录因子κBp65(NFκBp65)ELISA试剂盒
枯草芽孢杆菌丝氨酸或半胱氨酸蛋白水解酶抑制蛋白1抗体Human SCFR/c-Kit(Stem Cell Factor Receptor) ELISA Kit核转录因子κB(NFκB)ELISA试剂盒
钩端螺旋体(Lep)检测试剂盒(荧光-PCR法)信号转导分子SMAD5抗体双(环己)草酰二腙 Bis(cyclohexanone) OxalyldihydrazoneHuman, Mouse
硒结合蛋白1抗体3,3'-氧二 3,3'-Oxydipropionitrile >98.0%(GC)Human
SMAD家族9抗体3,3'-氧二 3,3'-Oxydipropionitrile >98.0%(GC)Human, Mouse
转录调控激活蛋白SNF5抗体3,3'-氧二 3,3'-Oxydipropionitrile >98.0%(GC)Human, Mouse, Rat
信号传导T**活化相关蛋白抗体双(2-乙) Bis(2-chloroethyl) Ether >99.0%(GC)Human, Mouse
唾液结合**球蛋白样凝集素9抗体双(2-羟乙)二硫代氨锌盐(II) Bis(2-hydroxyethyl)dithiocarbamic Acid Zinc(II) Salt >98.0%(T)Human
心血管调节肽Salusin-α抗体双(2-羟乙)二硫代氨铜(II) Copper(II) Bis(2-hydroxyethyl)dithiocarbamate >98.0%(T)Human, Mouse, Rat
S100B蛋白抗体N,N-双(2-羟乙)-3-苯 N,N-Bis(2-hydroxyethyl)-3-chloroaniline >90.0%(GC)Human
转录因子SOX-11蛋白抗体二乙二二乙 Diethylene Glycol Diethyl Ether >98.0%(GC)Human, Mouse