使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 异尖线虫(Ani)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64446
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
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PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
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PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
酿酒酵母肿瘤转移抑制基因H4抗体Human FSTL3(Follistatin-related protein 3) ELISA Kit胱抑素F(CST7)ELISA试剂盒
白侧耳神经元衍生孤儿受体1抗体Human GDF15(Growth Differentiation Factor 15) ELISA Kit胱抑素B(CSTB/CST6/STFB)ELISA试剂盒
平菇轴突生长诱向因子4抗体Human FCN2(Ficolin-2) ELISA Kit胱抑素A(CSTA/STF1/STFA)ELISA试剂盒
灰黄青霉脊髓灰质炎病受体相关蛋白4抗体Human PDGF-AB(Plaet-Derived Growth Factor AB) ELISA Kit胱天蛋白酶激活的脱氧核糖核酸酶(CAD)ELISA试剂盒
胎儿别样希瓦氏菌核因子/k基因结合核因子 p52/p100抗体Human FOLR1(Folate receptor alpha) ELISA Kit胱天蛋白酶9(Caspase-9)ELISA试剂盒
酿酒酵母线粒体复合物NDUFS7蛋白抗体Human FCN3(Ficolin-3) ELISA Kit胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA试剂盒
干酪乳杆菌尼曼匹克C2前体蛋白抗体Human Fractalkine(Chemokine C-X3-C-Motif Ligand 1) ELISA Kit胱天蛋白酶8(Caspase-8)ELISA试剂盒
黄褐曲霉烟酰腺嘌呤二核苷酸酶1抗体Human FSTL1(Follistatin-related protein 1) ELISA Kit胱天蛋白酶8(Casp-8)ELISA试剂盒
梭菌一氧化氮合成酶-1抗体(神经型)Human IL-16(Interleukin 16) ELISA Kit胱天蛋白酶-5(CASP5)ELISA试剂盒
褐球固氮菌转录因子相关蛋白NKX6.1抗体Human IL-12(Interleukin 12) ELISA Kit胱天蛋白酶3(Caspase-3)ELISA试剂盒
根瘤菌造血蛋白1抗体Human IL-15(Interleukin 15) ELISA Kit胱天蛋白酶3(Casp-3)ELISA试剂盒
顶孢霉骨巢蛋白抗体Human ACTα1(Actin Alpha 1, Skeletal Muscle) ELISA Kit胱天蛋白酶12(Casp-12)ELISA试剂盒
酿酒酵母NUP54抗体Human IGF-2(Insulin-like growth factor II) ELISA Kit胱天蛋白酶10(CASP10)ELISA试剂盒
寡养单胞菌属亲核素β1抗体Human IGF-1(Insulin-Like Growth Factor 1) ELISA Kit胱天蛋白酶1(Casp-1)ELISA试剂盒
柯奈尼亚小单孢菌谷氨酸受体NMDAζ1抗体Human IFNγ(Interferon gamma) ELISA Kit胱硫β-合酶(CBS)ELISA试剂盒
炭疽芽孢杆菌谷氨酸受体NMDAζ2抗体Human GDNF(Glial cell line-derived neurotrophic factor) ELISA Kit胍基丁脲水解酶/凝集酶(AGMAT)ELISA试剂盒
异尖线虫(Ani)检测试剂盒(荧光-PCR法)信号转导和转录激活因子5b抗体洋地黄甙 DIGITOXIN(P)Human, Mouse
磷化信号转导和转录激活因子5b抗体洋地黄甙 DIGITOXIN(P)Human, Mouse
血管内皮生长因子受体相关蛋白抗体毛地黄素 DIGITOXIGENIN(RG)Human, Mouse
钠氢通道蛋白9家族A9抗体毛地黄素 DIGITOXIGENIN(RG)Human, Mouse, Rat
类泛素蛋白3抗体毛地黄素 DIGITOXIGENIN(P)(PLEASE CALL)Human
神经迁移蛋白Slit2/3抗体毛地黄素 DIGITOXIGENIN(P)(PLEASE CALL)Human
跨膜蛋白Smoothened抗体洋地黄皂苷 DIGITONIN(RG)Human
斯钙素抗体洋地黄皂苷 DIGITONIN(RG)Human, Mouse, Rat
信号诱导增殖相关蛋白1抗体(-)-二氢香芹 DIHYDROCARVEOL, (-)-(RG)Human, Mouse
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。