使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 肺炎支原体(MP)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64448
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
布氏假单胞菌样蛋白2抗体Human IL-17E/IL-25(Interleukin 25) ELISA Kit骨钙素(Osteocalcin)ELISA试剂盒
枯草芽胞杆菌SNF1/AMP激酶相关激酶2抗体Human IL-31(Interleukin-31) ELISA Kit骨钙素(BGP)ELISA试剂盒
多毛孢菌鸡新城疫疫苗(鸡瘟4型混合病)抗体Human IGFBP-1(Insulin-like growth factor-binding protein 1) ELISA Kit骨成型蛋白受体Ⅱ(BMPR-Ⅱ)ELISA试剂盒
豇豆慢生根瘤菌神经外营养蛋白1抗体Human IL-1alpha(Interleukin 1 Alpha) ELISA Kit骨成型蛋白受体1A(BMPR-1A)ELISA试剂盒
香菇(L087)神经源性神经营养因子抗体Human IL-1beta(Interleukin 1 Beta) ELISA Kit骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA试剂盒
Marisediminicola神经转化酶2抗体Human GDF15(Growth Differentiation Factor 15) ELISA Kit骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA试剂盒
苏云金芽孢杆菌松蠋亚种神经肽W抗体Human IL1R1(Interleukin 1 Receptor Type I) ELISA Kit骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA试剂盒
产酸克雷伯氏菌神经肽Y受体5抗体Human FCN2(Ficolin-2) ELISA Kit骨成型蛋白15(BMP-15/GDF-9B)ELISA试剂盒
玉蜀黍赤霉菌神经肽Y受体4抗体Human FCN3(Ficolin-3) ELISA Kit骨保素(OPG)ELISA试剂盒
螺卷毛壳(只确定属)螺旋环螺旋蛋白1+2抗体Human PDGF-AB(Plaet-Derived Growth Factor AB) ELISA Kit骨保护素(OPG)ELISA试剂盒
松口蘑胚胎神经NNAT抗体Human SELE(E-Selectin) ELISA Kit谷胱甘肽硫转移酶pi基因(GSTpi)ELISA试剂盒
谷氨酸棒杆菌NUDCD3蛋白抗体Human FSTL3(Follistatin-related protein 3) ELISA Kit谷胱甘肽还原酶(GR)ELISA试剂盒
秦氏蜜环菌CD244自然杀伤受体2B4抗体Human ESM1(Endothelial Cell Specific Molecule 1) ELISA Kit谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)ELISA试剂盒
枯草芽孢杆菌磷酸化核因子活化T胞浆蛋白2抗体Human FAS(Tumor necrosisfactor receptor superfamily member 6) ELISA Kit谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)ELISA试剂盒
黑曲霉壬基酚抗体Human FASL(Factor Related Apoptosis Ligand) ELISA Kit谷胱甘肽S转移酶TT(GSTπ)ELISA试剂盒
栗酒裂殖酵母神经肿瘤Nova2抗原抗体Human FETUA(Fetuin A) ELISA Kit谷胱甘肽S转移酶(GSTs)ELISA试剂盒
肺炎支原体(MP)检测试剂盒(荧光-PCR法)性成纤维生长因子(多肽抗原)吉它霉素(标准品)Human
血管紧张素转换酶2抗原己内酰(标准品)Human
脑钠素(多肽抗原)加巴喷丁(标准品)Human, Mouse, Rat
生物素化脑钠素多肽加替沙星(标准品)Human, Mouse
过敏素C5(补体C5)抗原氨蝶呤(标准品)Human, Mouse
卵巢癌抗原氨蝶呤二钠盐 (标准品)Human, Mouse, Rat
Caspase 激活的脱氧核糖核酶(抗原)苯磺丁脲(标准品)Human, Mouse
肌红蛋白抗原苯咪唑Human, Mouse, Rat
钙调节蛋白-1(抗原)苯咪唑(标准品)Human, Mouse, Rat
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。