使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 人细小病毒B19(HPV B19)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64449
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸���遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
钻特省芽孢杆菌类固受体激活蛋白3抗体Human FAS(Tumor necrosisfactor receptor superfamily member 6) ELISA Kit谷胱甘肽(GSH)ELISA试剂盒
EC600*轴突导向因子1抗体Human FASL(Factor Related Apoptosis Ligand) ELISA Kit谷氨酸脱羧酶自身抗体IgM(GAD-Ab-IgM)ELISA试剂盒
塔宾曲霉酪氨酸激酶B抗体Human FETUA(Fetuin A) ELISA Kit谷氨酸脱羧酶自身抗体IgG(GAD-Ab-IgG)ELISA试剂盒
巴氏醋杆菌跨膜受体蛋白Notch-3抗体Human FGF19(Fibroblast growth factor 19)谷氨酸脱羧酶自身抗体(GAD-Ab)ELISA试剂盒
巴氏生孢八叠球菌中性粒弹性蛋白酶ELANE抗体Human FGF7(Fibroblast growth factor 7) ELISA Kit谷氨酸脱羧酶65(GAD65)ELISA试剂盒
根瘤菌型肝炎病NS4B(65kDa)抗体Human FGF21(Fibroblast growth factor 21) ELISA Kit谷氨酸脱羧酶(GAD)ELISA试剂盒
嗜冷杆菌神经生长因子受体相关蛋白1抗体Human FGF9(Fibroblast growth factor 9) ELISA Kit谷氨酸脱氢酶(GDH/GLDH)ELISA试剂盒
紫晶腊蘑死亡结构域蛋白NRH2抗体Human FGF4(Fibroblast growth factor 4) ELISA Kit谷氨酸受体(NMDAR)ELISA试剂盒
淡紫拟青霉神经丝蛋白抗体Human FN1(Fibronectin) ELISA Kit谷氨酸-半胱氨酸连接酶调节亚基(GCLM)ELISA试剂盒
微管螺旋链霉菌磷酸化核因子抗体Human FCN1(Ficolin-1) ELISA Kit谷氨酸[NMDA]受体亚基ε-2(NR-2)ELISA试剂盒
仰光链霉菌跨膜受体蛋白Notch-1抗体Human CHI3L1(Chitinase-3-like protein 1) ELISA Kit孤腓肽(OFQ/N)ELISA试剂盒
镰刀菌属磷酸化核受体Rev-Erbα抗体Human DCN(Decorin) ELISA Kit钩端螺旋体IgM(Lebtospira)ELISA试剂盒
鸭疫里氏杆菌鸡新城疫病抗体Human CST3(Cystatin C) ELISA Kit钩端螺旋体IgG(Leptospira)ELISA试剂盒
粘质沙雷氏菌还原型辅酶Ⅱ/磷酸酰腺嘌呤二核苷酸抗体Human SLAM/CD150(Signaling Lymphocytic Activation Molecule) ELISA Kit钩端螺旋体IgG(Lep IgG)ELISA试剂盒
塔里木类芽孢杆菌NIT2蛋白抗体Human c-MET(Hepatocyte growth factor receptor) ELISA Kit睾酮受体(TR)ELISA试剂盒
鳕盐球菌神经分化因子1抗体Human C5a(Complement Component 5a) ELISA Kit睾酮(Testoterone)ELISA试剂盒
人细小病毒B19(HPV B19)检测试剂盒(荧光-PCR法)性核蛋白1/锌指蛋白basonuclin抗体白细胞介素1α(IL-1α/IL-1F1)检测试剂盒IL-1α/IL-1F1 ELISA Kit
癌膜蛋白11抗体(前梯度同源蛋白2)白细胞介素1α(IL-1α)检测试剂盒IL-1α ELISA Kit
人脑钠素单克隆抗体白细胞介素17(IL-17)检测试剂盒IL-17 ELISA Kit
B**成熟因子抗体白细胞介素16(IL-16)检测试剂盒IL-16 ELISA Kit
促凋亡Bik蛋白抗体白细胞介素13(IL-13)检测试剂盒IL-13 ELISA Kit
癌抑癌蛋白抗体白细胞介素12(IL-12/P70)检测试剂盒IL-12/P70 ELISA Kit
癌易感因环状结构域蛋白抗体白细胞介素12(IL-12/P40)检测试剂盒IL-12/P40 ELISA Kit
癌相关抗原BRCAA1抗体白细胞介素10(IL-10)检测试剂盒IL-10 ELISA Kit
脑组织表达X连锁蛋白1抗体白细胞分化抗原配体40(CD40/TNFRSF5)检测试剂盒CD40/TNFRSF5 ELISA Kit
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。