使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 心病毒(SAFV)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64453
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
金龟子绿僵菌神经调节肽S抗体Human ANGPTL4(Angiopoietin-related protein 4) ELISA Kit甘油二酯(DAG)ELISA试剂盒
硫化物氧化假诺卡氏菌分子生物钟调控蛋白NOC抗体Human PRB3(Basic Salivary Proline Rich Protein 3) ELISA Kit甘露糖受体(MR)ELISA试剂盒
金黄色葡萄球菌神经粘附蛋白NGN抗体Human BTC(Betacellulin) ELISA Kit甘露糖凝集素受体(MBLR)ELISA试剂盒
拟茎点霉神经**蛋白Nav1抗体Human BDNF(Brain Derived Neurotrophic Factor) ELISA Kit甘露糖结合蛋白/甘露糖结合凝集素(MBP/MBL)ELISA试剂盒
墨汁鬼伞轴索过度生长抑制因子B受体抗体Human BAFF(B-Cell Activating Factor) ELISA Kit甘露糖(MN)ELISA试剂盒
高加索链霉菌核受体0相关蛋白B家族2抗体Human AZU1(Azurocidin) ELISA Kit甘露糖(Mannose)ELISA试剂盒
微胶镰孢磷酸化DNA修复蛋白NBS1抗体Human BMP-2(Bone Morphogenetic Protein 2) ELISA Kit甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶(MASP)ELISA试剂盒
香菇天冬氨酸蛋白酶ASP4抗体Human PECAM-1(Plaet/Endothelial Cell Adhesion Molecule 1) ELISA Kit甘露聚糖结合凝集素丝氨酸肽1(C4/C2 RA反应因子的激活因子)(MASP1)ELISA试剂盒
大肠埃希菌肉豆蔻酰基转移酶2-N端肽抗体Human ANG2(Angiopoietin-2) ELISA Kit甘胆酸(CG)ELISA试剂盒
芽枝状枝孢核因子活化T胞浆蛋白2抗体Human TSP-2(Thrombospondin-2) ELISA Kit甘肽/甘素(GAL)ELISA试剂盒
桃干枯壳蕉孢菌突触粘附分子1抗体Human VEGFR1(Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 1) ELISA Kit钙转运ATP酶2C型成员1(ATP2C1)ELISA试剂盒
怀槐多年卧孔菌核孔糖蛋白P62抗体Human PLGF(Placental Growth Factor) ELISA Kit钙粘蛋白相关的神经受体1(CNR-1)ELISA试剂盒
固氮野野村氏菌神经营养因子3抗体Human A2M(Alpha-2-macroglobulin) ELISA Kit钙依赖性胞浆型磷脂酶A2(iPLA2)ELISA试剂盒
美澳型核果褐腐病菌NEEP21蛋白抗体Human ACE2(Angiotensin-converting enzyme 2) ELISA Kit钙网蛋白(CRT)ELISA试剂盒
小炭球菌磷酸化谷氨酸受体2B抗体Human Activin A ELISA Kit钙调素特异抗体(CAM-ab)ELISA试剂盒
浅多色链霉菌磷酸化谷氨酸受体2B抗体Human ACE(Angiotensin I Converting Enzyme) ELISA Kit钙调素(CAM)ELISA试剂盒
心病毒(SAFV)检测试剂盒(荧光-PCR法)性磷酶(AP)标记的羊抗小鼠IgM3-溴三氟苯 3-Bromobenzotrifluoride >99.0%(GC)Human, Mouse, Rat
辣根过氧化物酶标记的兔抗猪IgG3-溴三氟苯 3-Bromobenzotrifluoride >99.0%(GC)Human
胶体金标记的兔抗猪IgG2-溴三氟苯 2-Bromobenzotrifluoride >97.0%(GC)Human, Mouse, Rat
PE标记的兔抗猪IgG2-溴三氟苯 2-Bromobenzotrifluoride >97.0%(GC)Human
PE-CY5标记的兔抗猪IgG三溴 Bromotrichloromethane >98.0%(GC)Human, Mouse
PE-Cy7标记的兔抗猪IgG三溴 Bromotrichloromethane >98.0%(GC)Human, Mouse, Rat
生物素标记的兔抗猪IgG4-溴苯 4-Bromotoluene >99.0%(GC)Human, Mouse, Rat
生物素标记的兔抗大鼠IgG4-溴苯 4-Bromotoluene >99.0%(GC)Human, Mouse, Rat
辣根过氧化物酶标记的小鼠抗兔IgM3-溴苯 3-Bromotoluene >98.0%(GC)Human, Mouse
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。