使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 羊源性成分(Ovine)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64476
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
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PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
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PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
苏云金芽胞杆菌印第安那亚种钙粘蛋白21抗体Anti-APRT Antibody胞外超氧化物歧化酶(SOD3)ELISA试剂盒
解脂亚罗酵母钙粘蛋白β12抗体Anti-AQP10 Antibody胞浆型磷脂酶A2-α(cPLA2-α)ELISA试剂盒
脆泊氏孔菌磷酸化磷脂酰肌激酶调节亚单位gamma抗体Anti-APRT Antibody胞浆型磷脂酶A2(cPLA2)ELISA试剂盒
大肠埃希氏菌甲状旁腺相关蛋白抗体Anti-AQP1 Antibody胞浆球蛋白(CIg)ELISA试剂盒
粉红掷孢酵母蛋白酪氨酸磷酸酶-1B抗体Anti-AQP1 Antibody(PB0498)伴侣蛋白10(CPN10)ELISA试剂盒
短乳杆菌*Cyclin A1相互作用蛋白抗体Anti-AQP11 Antibody半乳糖凝集素7(Gal-7)ELISA试剂盒
芳香镰孢野生型P53诱导基因1单克隆抗体Anti-AQP3 Antibody半乳糖凝集素3(Galectin3)ELISA试剂盒
清酒假丝酵母多囊肾蛋白1抗体Anti-AQP2 Antibody(PB0499)半乳糖(Galactose)ELISA试剂盒
大肠埃希氏菌○抗原微量凝集定型血清诊断液 ○7多囊肾蛋白2抗体Anti-AQP3 Antibody半胱氨酰白三烯(CysLTs)ELISA试剂盒
Marisediminicola凋亡相关蛋白4抗体Anti-AQP2 Antibody半胱氨酸蛋白酶抑制剂/胱抑素C(Cys-C)ELISA试剂盒
硬结节杆菌磷脂酰肌激酶催化亚单位D抗体Anti-AQP4 Antibody板层素相关多肽2亚型α(TMPO)ELISA试剂盒
栗疫菌血小板源性生长因子受体β样蛋白抗体Anti-AQP5 Antibody瘢痕性天疱疮抗体(CP)ELISA试剂盒
运动节杆菌磷酸化磷酯酶Cβ3抗体Anti-AQP4 Antibody白血病抑制因子受体(LIFR)ELISA试剂盒
肉色香蘑磷酸化蛋白激酶样内质网激酶抗体Anti-AQP4 Antibody(PB0500)白血病抑制因子(LIF)ELISA试剂盒
黑曲霉变种6磷酸果糖激酶2抗体Anti-AQP5 Antibody白酯酶(LE)ELISA试剂盒
酿酒酵母磷酸化6磷酸果糖激酶2抗体Anti-AQP6 Antibody白调节素(LR)ELISA试剂盒
羊源性成分(Ovine)检测试剂盒(荧光-PCR法)人**球蛋白G(IgG)酶联**吸附测定试剂盒Human LRRC52 ELISA Kit肾上腺髓质素抗体
人血清转铁蛋白(TF)酶联**吸附测定试剂盒Human LRRC20 ELISA Kit腺苷受体A3抗体
人卵泡抑素样蛋白1(FSTL1)酶联**吸附测定试剂盒Human LRCH3 ELISA KitADRA2肾上腺素能受体2抗体
人赖氨酰氧化酶(LOX)酶联**吸附测定试剂盒 Human LRCH2 ELISA Kit肾上腺素能受体β1抗体
人绒毛膜促性腺**(CG)酶联**吸附测定试剂盒Human LRPPRC ELISA Kit肾上腺素能受体β2/β2-AR抗体
人生长**(GH)酶联**吸附测定试剂盒Human LRP2BP ELISA Kit晚期糖基化终末产物抗体
人IV型胶原(COL4)酶联**吸附测定试剂盒Human LRMP ELISA Kit软骨蛋白聚糖抗体
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。