使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 鸡源性成分(Chicken)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64477
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
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PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
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PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
水稻节杆菌磷酸化磷脂酰肌激酶抗体Anti-AQP6 Antibody白球蛋白样受体亚家族B成员4(LILRB4)ELISA试剂盒
弯孢菌磷酸化蛋白激酶C α/β2抗体Anti-AQP7 Antibody白抗原DR(HLA-DR)ELISA试剂盒
大肠埃希氏菌蛋白激酶C α抗体Anti-AQP8 Antibody白抗原B27(HLA-B27)ELISA试剂盒
琉球曲霉磷酸化酮酸激酶M2抗体Anti-AQP9 Antibody白活化黏附因子(ALCAM)ELISA试剂盒
近绿曲霉磷酸化蛋白激酶R抗体Anti-AQP9 Antibody白共同抗原(LCA/CD45)ELISA试剂盒
绿垂曲霉磷酸化蛋白激酶R抗体Anti-AQP9 Antibody白弹性蛋白酶(HLE)ELISA试剂盒
球毛壳磷酸化蛋白激酶R抗体Anti-AR Antibody白色***(C.albicans)ELISA试剂盒
直丝淡蓝褐链霉菌磷酸化磷酯酶Cγ2抗体Anti-ARAF Antibody白三烯E4(LTE4)ELISA试剂盒
大肠埃希氏菌磷酸化磷酯酶Cγ2抗体Anti-ARC Antibody白三烯D4(LTD4)ELISA试剂盒
单孢虫道酵母磷酯酶Cγ1抗体Anti-ARG1 Antibody白三烯C4(LTC4)ELISA试剂盒
橘色硬皮马勃磷酸化血小板源性生长因子受体α/β抗体Anti-AREG Antibody白三烯B4(LTB4)ELISA试剂盒
蛛网不显枝霉中华变种磷酸化血小板源性生长因子受体-B抗体Anti-ARG1 Antibody白介素增强子结合因子2(ILF2/NF45/PRO3063)ELISA试剂盒
需土节杆菌磷酸化血小板源性生长因子受体-B抗体Anti-ARFGAP1 Antibody白介素受体相关激酶(IRAK)ELISA试剂盒
葡萄球菌属磷酸化血小板源性生长因子受体-B抗体Anti-ARF6 Antibody白介素9(IL-9)ELISA试剂盒
草假单胞菌磷酸化血小板源性生长因子受体-B抗体Anti-ARG2 Antibody白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA试剂盒
豌豆根瘤菌磷酸化血小板源性生长因子受体-B抗体Anti-ARHGEF1 Antibody(PB1099)白介素8(IL-8)ELISA试剂盒
鸡源性成分(Chicken)检测试剂盒(荧光-PCR法)人纤维连接蛋白(FN)酶联**吸附测定试剂盒Human LRDD ELISA Kit5-氨基乙酰酸合酶1抗体
人白介素9(IL-9)酶联**吸附测定试剂盒Human LRPAP1 ELISA Kitp53凋亡激蛋白1抗体
人I型前胶原(PCI)酶联**吸附测定试剂盒Human LRR 1(Leucine-rich repeat protein 1) ELISA KitP53凋亡激蛋白2抗体
人III型前胶原(PCIII)酶联**吸附测定试剂盒Human LRRC1 ELISA Kit激活素受体2B抗体
人III型前胶原氨基端原肽(PIIINP)酶联**吸附测定试剂盒Human LPIN2 ELISA KitAIMP2抗体
人基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)酶联**吸附测定试剂盒Human LPHN3 ELISA Kit乙酰胆碱酶抗体
人I型前胶原氨基端原肽(PINP)酶联**吸附测定试剂盒Human LPPR2 ELISA Kit5-氨基乙酰酸合酶1抗体
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。