使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 绵羊CYTB基因检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64482
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
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PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合��合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
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PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
巨大芽孢杆菌磷脂酰肌激酶(PI3Kβ)抗体Anti-ATXN1 Antibody(PB0391)靶向核糖核酸酶(TR)ELISA试剂盒
细脚棒束孢磷脂酸磷酸酶2结构域3抗体Anti-ATXN2 Antibody八聚体转录因子(OTF2B)ELISA试剂盒
枯草芽孢杆菌胞质分裂调控蛋白1抗体Anti-ATXN2 Antibody八聚体转录因子(OTF2A)ELISA试剂盒
黑曲霉磷酸化蛋白磷酸酶2A(PP2Aα)抗体Anti-ATXN3 Antibody(PB0392)艾杜糖硫酸酯酶(IDS)ELISA试剂盒
酿酒酵母石骨症相关蛋白PLEKHM1抗体Anti-AURKB Antibody癌症促凝素(CP)ELISA试剂盒
大肠埃希氏杆菌血小板白C激酶底物同源结构域M2抗体Anti-AVPR1A Antibody癌胚铁蛋白(CEF)ELISA试剂盒
花楸盘多毛孢血小板白C激酶底物同源结构域M3抗体Anti-AVPR1A Antibody癌胚抗原(CEA/CD66)ELISA试剂盒
雪白根霉多腺苷二磷酸多聚酶抗体(N端)Anti-AZIN2 Antibody癌抗原27-29(CA 27-29)ELISA试剂盒
河流弧菌酪氨酸磷酸酶PTPδ抗体 蛋白酪氨酸磷酸酶D受体抗体Anti-AXL Antibody癌蛋白诱导转录物3(OIT3)ELISA试剂盒
紫色小单孢菌(绛红小单孢菌)钙粘蛋白相关神经受体8抗体Anti-B2M Antibody阿米巴(Amebiasis)ELISA试剂盒
沙小单胞菌原钙粘附蛋白18抗体Anti-B2M Antibody阿立新A(Orexin A)ELISA试剂盒
托木尔峰假单胞菌原钙粘附蛋白20抗体Anti-AZU1 Antibody阿拉伯半乳糖蛋白(AGPs)ELISA试剂盒
球形赖氨酸芽孢杆菌原钙粘附蛋白8抗体Anti-B3GNT8 Antibody阿黑皮素原(POMC)ELISA试剂盒
蚜虫莫氏黑粉菌 鱼精蛋白2抗体Anti-B2M Antibody吖啶橙(AO)ELISA试剂盒
金黄色葡萄球菌piwi样4蛋白抗体Anti-BAG2 Antibodyω干扰素(IFN-ω/IFNB)ELISA试剂盒
纳西杆菌属piwi样3蛋白抗体Anti-BAG2 AntibodyκB抑制蛋白激酶(IKK)ELISA试剂盒
绵羊CYTB基因检测试剂盒(荧光-PCR法)人5核苷酸酶(5-NT)酶联**吸附测定试剂盒 Human LIMS1 ELISA Kit凋亡相关蛋白3抗体
人6酮前列腺素(6-K-PG)酶联**吸附测定试剂盒 Human LGI3 ELISA Kit肌动蛋白α/α-SMA/α Actin抗体
人6-羟多巴(6-OHDA)酶联**吸附测定试剂盒 Human LIMK2 ELISA KitATP结合蛋白家族7抗体
人抗肌动蛋白抗体(AAA)酶联**吸附测定试剂盒 Human LIMS1 ELISA KitASCL2蛋白抗体
人5羟基二十烷四烯酸(5-HETE)酶联**吸附测定试剂盒 Human LGI2 ELISA Kit磷酸化脊髓小脑失调症蛋白1抗体
人抗白蛋白抗体(AAA)酶联**吸附测定试剂盒 Human LGP2 ELISA Kit磷酸化活化转录因子1抗体
人α1抗胰糜蛋白酶(α1ACT)酶联**吸附测定试剂盒 Human LGI3 ELISA Kit磷酸化活化复制因子2抗体
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。