使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 牛BGH基因检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64483
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
金乳牛肝菌猪繁殖与呼吸综合征/猪蓝耳病病抗体Anti-BAG3 Antibodyγ肽(Pγ)ELISA试剂盒
美澳型核果褐腐病菌凋亡相关蛋白10抗体Anti-BAG1 Antibodyγ谷氨酰转移酶(GGT)ELISA试剂盒
美澳型核果褐腐病菌钙调蛋白依赖性蛋白激酶磷酸酶抗体Anti-BAG1 Antibodyγ-谷氨酰环化转移酶(GGCT)ELISA试剂盒
门多萨假单胞菌丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶PIM3抗体Anti-BAG5 Antibodyγ谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-ECS)ELISA试剂盒
蜡样芽孢杆菌组蛋白精氨酸甲基转移酶5抗体Anti-BAG5 Antibodyγ谷氨酸-半胱氨酸合成酶(γ-GCS)ELISA试剂盒
热带假丝酵母原钙粘附蛋白11X抗体Anti-BAG3 Antibodyγ干扰素诱导蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA试剂盒
粉红聚端孢霉原钙粘附蛋白11Y抗体Anti-BAK(BAK1) Antibodyγ干扰素诱导单核因子(MIGF/CXCL9)ELISA试剂盒
暗褐色毛霉原钙粘附蛋白12/血管内皮钙粘蛋白2抗体Anti-BAG6 Antibodyγ干扰素受体(IFN-γR)ELISA试剂盒
枯草芽孢杆菌原钙粘附蛋白17抗体Anti-BAP1 Antibodyγ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒
三叶草根瘤菌原钙粘附蛋白1抗体Anti-BAX Antibodyγ干扰素(IFNγ)ELISA试剂盒
杰丁毕赤酵母原钙粘附蛋白α1抗体Anti-BAK1 Antibodyγ分泌素激活蛋白(PION)ELISA试剂盒
深红沙雷氏菌原钙粘附蛋白α3抗体Anti-BAMBI Antibodyγ氨基丁酸(GABA)ELISA试剂盒
金龟子绿僵菌原钙粘附蛋白α4抗体Anti-BAX Antibodyβ-转导素重复序列包含蛋白(BTRC)ELISA试剂盒
短乳杆菌原钙粘附蛋白α5抗体Anti-BAX Antibodyβ抑制蛋白2(ARRB2)ELISA试剂盒
发酵假丝酵母原钙粘附蛋白α9抗体Anti-BAX Antibodyβ血小板球蛋白/β血栓环蛋白(β-TG)ELISA试剂盒
侧毛壳原钙粘附蛋白α7抗体Anti-BAX Antibodyβ血小板球蛋白(β-TG)ELISA试剂盒
牛BGH基因检测试剂盒(荧光-PCR法)人白介素16(IL-16)酶联**吸附测定试剂盒Human LGR5 ELISA Kit磷酸化活化复制因子2抗体
人Apelin 17蛋白(AP17)酶联**吸附测定试剂盒 Human LDLRAD1 ELISA Kit磷酸化活化复制因子2抗体
人双调蛋白(AR)酶联**吸附测定试剂盒 Human LDOC1 ELISA Kit磷酸化活化复制因子2抗体
人抑制素A(INHA)酶联**吸附测定试剂盒Human LEF1 ELISA Kit磷酸化活化复制因子2抗体
人芳香酶(ARO)酶联**吸附测定试剂盒Human LGR6 ELISA Kit磷酸化活化复制因子2抗体
人胆绿素还原酶B(BLVRB)酶联**吸附测定试剂盒Human LCOR ELISA Kit活化转录因子5抗体
人抗心磷脂抗体IgA(ACA-IgA)酶联**吸附测定试剂盒 Human LCORL ELISA Kit活化转录因子6β抗体
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。