使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 鼠源性成分(Mouse)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64487
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
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PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
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PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
谢氏酸杆菌磷酸化蛋白激酶C抗体Anti-BIRC5 Antibodyβ2糖蛋白1抗体IgG(β2-GP1 Ab IgG)ELISA试剂盒
蛹虫草(北冬虫夏草,北虫草)磷酸化蛋白激酶C抗体Anti-BIRC5 Antibodyβ2糖蛋白1抗体IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)ELISA试剂盒
嗜盐栖盐水芽孢杆菌磷酸化肿瘤抑制基因PTEN抗体Anti-BIRC5 Antibodyβ2糖蛋白1抗体IgA(β2-GP1 Ab IgA)ELISA试剂盒
肠道致病性大肠埃希氏菌磷酸化磷脂酰肌激酶催化亚单位A抗体Anti-BIRC5 Antibodyβ2糖蛋白(β2-GP)ELISA试剂盒
虎掌菌1号*磷酸化磷脂酰肌激酶抗体Anti-BIRC7 Antibodyβ1,4-N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(B4GALNT2)ELISA试剂盒
德里腐霉磷酸化磷脂酰肌激酶抗体Anti-BMI1 Antibodyα烯化酶(αENOL)ELISA试剂盒
林芝假丝酵母磷酸化蛋白激酶C抗体Anti-BMI1 Antibodyα烯化酶(ENO1/ENO1L1/MBPB1/MPB1)ELISA试剂盒
褐孢大秃马勃磷酸化蛋白激酶C抗体Anti-BIRC7 Antibodyα突触核蛋白(α-SYN)ELISA试剂盒
微小杆菌磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶α2抗体Anti-BMP15 Antibodyα酮戊二酸脱氢酶(α-KGDHC)ELISA试剂盒
香菇蛋白酪氨酸磷酸酶1C抗体Anti-BMP2 Antibodyα乳清蛋白(α-La)ELISA试剂盒
链霉菌磷酸化蛋白酪氨酸磷酸酶1C抗体Anti-BMP4 Antibodyα葡萄糖苷酶(α-glucosidase)ELISA试剂盒
矮小伞枝霉磷酸化蛋白酪氨酸磷酸酶1C抗体Anti-BMP2 Antibody(PB0727)α葡萄糖苷酶(α-Glu)ELISA试剂盒
大肠埃希菌磷脂酰肌激酶3催化亚单位3抗体Anti-BMP15 Antibodyα平滑肌肌动蛋白(α-SMA)ELISA试剂盒
单梗头孢霉属磷酸化磷脂酰肌激酶3催化亚单位3抗体Anti-BMP4 Antibodyα-内肽(α-EP)ELISA试剂盒
毛尖蘑磷酸化磷脂酰肌激酶3催化亚单位3抗体Anti-BMP4 Antibodyα肌动蛋白(α Actin)ELISA试剂盒
Virgibacillus磷酸化蛋白激酶C theta抗体Anti-BMP5 Antibodyα横纹肌肌动蛋白(α-SCA)ELISA试剂盒
鼠源性成分(Mouse)检测试剂盒(荧光-PCR法)人抗****(ADH)酶联**吸附测定试剂盒Human LCK ELISA Kit溶血磷脂酰基转移酶抗体
人脂联素受体1(ADIPOR1)酶联**吸附测定试剂盒 Human LCA5 ELISA Kit锚蛋白重复及SAM结构域蛋白3抗体
人脂联素受体2(ADIPOR2)酶联**吸附测定试剂盒 Human LBR ELISA Kit磷酸化间变型**瘤激酶抗体
人肾上腺髓质素(ADM)酶联**吸附测定试剂盒 Human LCE1B ELISA Kit酰基辅酶A脱氢酶很长链抗体
人肾上腺素能α1A受体(ADRA1A)酶联**吸附测定试剂盒Human LARS ELISA Kit信号转导衔接结合蛋白抗体
人脂肪分化相关蛋白(ADRP)酶联**吸附测定试剂盒 Human LARS2 ELISA Kit锚蛋白重复序列-因子信号抑制物盒蛋白家族3抗体
人白介素20(IL-20)酶联**吸附测定试剂盒Human LARS ELISA Kit有丝分裂激酶B抗体
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。