使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 火鸡源性成分 (Turkey)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64493
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
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PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
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PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
尖孢隔指孢磷酸化蛋白激酶C(T500)抗体Anti-CAPN1 AntibodyS100蛋白(S-100)ELISA试剂盒
根际链霉菌磷酸化肿瘤抑制基因P53抗体Anti-CARD4/NOD1 AntibodyS-100B蛋白(S-100B)ELISA试剂盒
葡萄球菌磷酸化p21激活激酶1抗体Anti-Carbonic Anhydrase 13/CA13 AntibodyS100B蛋白(S-100B)ELISA试剂盒
黑曲霉磷酸化p21激活激酶2抗体Anti-CARD9 AntibodyRNA结合蛋白FUS(FUS/TLS)ELISA试剂盒
灵芝(红芝, 赤芝)磷酸化p21激活激酶3抗体Anti-Cardiotrophin1(CT-1) AntibodyRho家族GTP酶1(RND1)ELISA试剂盒
酿酒酵母磷酸化p21激活激酶1/2/3抗体Anti-CARM1 AntibodyRho关联含卷曲螺旋蛋白激酶2(Rock-2)ELISA试剂盒
毛柄菌(金针菇)磷酸化核糖体S6蛋白激酶抗体Anti-CASP1(P10) AntibodyRho GDP解离抑制因子1(ARHGDIA/GDIA1)ELISA试剂盒
聚贪噬菌腺衍生血管内皮生长因子抗体Anti-CASP1(P20) AntibodyREST协阻抑因子3(RCOR3)ELISA试剂盒
蜡状芽孢杆菌蛋白激酶样内质网激酶抗体Anti-CARS Antibodyras同源物基因家族成员b(RHOB)ELISA试剂盒
肠膜明串珠菌前列腺特异膜抗原抗体Anti-CASP1(P20) AntibodyP选择素糖蛋白配体1(PSGL-1)ELISA试剂盒
假单胞菌磷脂酰肌激酶抗体Anti-CASP10 AntibodyP选择素(P-Selectin/CD62P/GMP140)ELISA试剂盒
灰平链霉菌胎盘生长因子抗体Anti-CASP12 AntibodyP选择素(P-Selectin/CD62P)ELISA试剂盒
腐皮壳蛋白激酶A抗体Anti-CASP14(P10) AntibodyP选择素(P-Selectin)ELISA试剂盒
死亡谷芽孢杆菌蛋白激酶C beta 1/2抗体Anti-CASP2 AntibodyP物质受体(SP-R)ELISA试剂盒
豆芽菌胎盘生长因子抗体Anti-CASP2(P12) AntibodyP物质(SP)ELISA试剂盒
禾谷胎盘生长因子抗体Anti-CASP2(small) AntibodyP糖蛋白/渗透性糖蛋白(P-gp)ELISA试剂盒
火鸡源性成分 (Turkey)检测试剂盒(荧光-PCR法)人血管紧张素II受体2(ANGⅡR2)酶联**吸附测定试剂盒 Human MAS1L ELISA Kit自噬相关蛋白4A抗体
人血管**素4(ANGPT4)酶联**吸附测定试剂盒 Human MAST1 ELISA Kit载脂蛋白A4抗体
人血管**素样蛋白1(ANGPTL1)酶联**吸附测定试剂盒 Human MAST3 ELISA Kit12脂氧合酶抗体
人血管**素样蛋白2(ANGPTL2)酶联**吸附测定试剂盒 Human C10orf58(Redox-regulatory protein FAM213A) ELISA Kit血管紧张素III抗体
人血管**素样蛋白3(ANGPTL3)酶联**吸附测定试剂盒 Human NY-ESO-1(Cancer/testis antigen 1) ELISA Kit腺苷酸环化酶3抗体
人血管**素样蛋白4(ANGPTL4)酶联**吸附测定试剂盒 Human Caspase 12 ELISA Kit血管动蛋白抗体
人血管**素样蛋白6(ANGPTL6)酶联**吸附测定试剂盒 Human CD320 ELISA Kit腺病早期E1A蛋白抗体
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。