使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 转基因水稻LLRICE601检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64504
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的��实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
灰树花磷酸化血小板源性生长因子受体αAnti-CD209 AntibodyAgouti相关蛋白(AGRP)ELISA试剂盒
果蝇克鲁维酵母儿茶酚氧化酶PPO抗体Anti-CD24 AntibodyAFG3样蛋白2(AFG3L2)ELISA试剂盒
云芝蛋白激酶C抗体Anti-CD244 AntibodyAdropin(ENHO)ELISA试剂盒
白囊耙齿菌脂滴包被蛋白Perilipin-A抗体Anti-CD244 AntibodyADP-核糖基化因子5(ARF5)ELISA试剂盒
王氏薄孔菌多聚腺苷酸结合蛋白抗体Anti-CD274 AntibodyADP-核糖基化因子4(ARF4)ELISA试剂盒
焦瑞身氏溶杆菌核纤层蛋白A相关结构蛋白1抗体Anti-CD274 AntibodyADAM金属肽酶含血小板反应蛋白1基元4(ADAMTS4)ELISA试剂盒
冷弯曲菌PCID2蛋白抗体Anti-CD2AP AntibodyⅣ型前胶原肽(PⅣNP)ELISA试剂盒
三叶草根瘤菌腺苷酸硫酸激酶1抗体Anti-CD27 Antibody(PB0974)Ⅳ型前胶原氨基末端肽(PⅣNP)ELISA试剂盒
谢瓦散囊菌腺苷酸硫酸激酶2抗体Anti-CD2AP AntibodyⅣ型胶原(Col Ⅳ)ELISA试剂盒
Winogradskyella multivorans 蛋白酶激活受体3抗体Anti-CD274 AntibodyⅣ型胶原(Ⅳ-C)ELISA试剂盒
黑曲霉MAWD结合蛋白抗体Anti-CD274 AntibodyⅢ型前胶原肽(PⅢP)ELISA试剂盒
蜡样芽孢杆菌PCID1蛋白抗体Anti-CD2AP AntibodyⅢ型前胶原肽(PⅢNP)ELISA试剂盒
黑姬菇PDZ结构域PDZK6蛋白抗体Anti-CD30/TNFRSF8 AntibodyⅢ型前胶原氨基末端肽(PⅢNP)ELISA试剂盒
白橙盖鹅膏菌吡哆激酶抗体Anti-CD33 AntibodyⅢ型前胶原氨基端肽(PⅢNT)ELISA试剂盒
黄溶链霉菌PDZ结构域PDZK1蛋白抗体Anti-CD34 AntibodyⅢ型前胶原C端肽(PⅢCP)ELISA试剂盒
Sphingomonas yunnanensis前列腺癌激活蛋白抗体Anti-CD33 Antibody(PB0975)Ⅲ型前胶原(HPCⅢ)ELISA试剂盒
转基因水稻LLRICE601检测试剂盒(荧光-PCR法)人血红蛋白(HB)酶联免吸附测定试剂盒Human MARK4 ELISA Kit锚定蛋白样蛋白1抗体
人全色素C合酶(HCCS)酶联免吸附测定试剂盒 Human MBD5(Methyl-CpG-binding domain protein 5) ELISA Kit腺苷酸激酶2抗体
人钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶IIα(CAMK2α)酶联免吸附测定试剂盒Human MBIP ELISA Kit顶体前体蛋白抗体
人Bcl2关联永生基因3(BAG3)酶联免吸附测定试剂盒Human MARS ELISA Kit黑色素瘤缺失样蛋白1抗体
人芳基硫酸酯酶B(ARSB)酶联免吸附测定试剂盒 Human MARVELD2 ELISA Kit未知糖基化转移酶AER61抗体
人组氨酸丰富糖蛋白(HRG)酶联免吸附测定试剂盒 Human MAEA ELISA Kit铁蛋白Fe65抗体
人硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HSPG)酶联免吸附测定试剂盒Human MARVELD3 ELISA Kit抑癌基因ras同源家族1抗体
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
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