使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 转基因植物Cry1A(c)基因检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64508
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延��是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
副结核补体结合试验抗原蛋白S抗体Anti-CD73/Nt5e Antibody3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合酶1(HMGCS1)ELISA试剂盒
球孢白僵菌多瘤病增强了结合蛋白2β抗体Anti-CD74 Antibody3-葡萄糖苷酸孕二(PdG)ELISA试剂盒
芽孢杆菌属磷酸二酯酶4D抗体Anti-CD79A Antibody28S抗核糖体抗体(28S rRNP)ELISA试剂盒
木素木霉前纤维蛋白2抗体Anti-CD79B Antibody(PB0117)26S蛋白酶体非ATP酶调节亚基11(PSMD11)ELISA试剂盒
绒边乳菇脯氨酰羧肽酶抗体Anti-CD8 Alpha/Cd8a Antibody26S蛋白酶体(26S PSM)ELISA试剂盒
绛红产色小单胞菌P2Y4受体抗体Anti-CD8 alpha/Cd8a Antibody25羟基维生素D3(25(OH)D3/25 HVD3)ELISA试剂盒
乳酸乳球菌乳亚种瘤促活化因子3抗体Anti-CD81 Antibody25羟基维生素D3(25 HVD3)ELISA试剂盒
枯斑拟盘多毛孢磷脂酰乙结合蛋白1抗体Anti-CD80 Antibody25羟基维生素D2(25 HVD2)ELISA试剂盒
石蕊素链霉菌外周蛋白抗体Anti-CD79A Antibody(PB0116)20S蛋白酶体(20SP)ELISA试剂盒
日本裂殖酵母人前列腺特异性抗原单克隆抗体(包被)Anti-CD80 Antibody2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)ELISA试剂盒
尖角凸脐蠕孢鼠抗人前列腺特异性抗原单克隆抗体(检测)Anti-CD81 Antibody2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)ELISA试剂盒
真姬菇抑制素/肿瘤抑制因子抗体Anti-CD81 Antibody2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)ELISA试剂盒
总状共头霉脂蛋白磷脂酶A2抗体Anti-CD81 Antibody2,3Dinor血栓烷B2(2,3-dinor-TXB2)ELISA试剂盒
球形芽孢杆菌重组金黄色葡萄球菌蛋白A抗体Anti-CD86 Antibody2 型次核苷酸脱氢酶(IMPDH)(IMPDH2)ELISA试剂盒
固氮菌雌受体共调节因子抗体Anti-CD82 Antibody1型1-磷酸鞘氨受体(S1P1)ELISA试剂盒
尖孢镰孢PSP抗体Anti-CD82 Antibody(PB0118)17酮皮质类固(17-KS)ELISA试剂盒
转基因植物Cry1A(c)基因检测试剂盒(荧光-PCR法)人胰岛素样生长因子结合蛋白5(IGFBP-5)酶联疫吸附测定试剂盒Human LY96 ELISA Kit糖尿病相关肽/胰岛淀粉样肽抗体
人胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)酶联疫吸附测定试剂盒Human LY6K ELISA Kit血管紧张素Ⅱ抗体
人抗II型胶原抗体(Anti-CIIAb)酶联疫吸附测定试剂盒Human LYAR ELISA Kit血管紧张素Ⅱ受体1抗体
人胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP-2)酶联疫吸附测定试剂盒Human LYG1 ELISA Kit血管**素-1抗体
人胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP-7)酶联疫吸附测定试剂盒Human LYN ELISA Kit膜粘连蛋白5抗体
人膜联蛋白A2(ANXA2 )酶联疫吸附测定试剂盒 Human LYPLA1 ELISA Kit重组膜粘连蛋白5抗体
人胰岛素样生长因子结合蛋白6(IGFBP-6)酶联疫吸附测定试剂盒Human LYRM7 ELISA Kit衔接蛋白α-Adaptin抗体
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
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