使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 大豆内源基因Lectin检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64511
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与���物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
松口蘑丝氨酸/苏氨酸激酶蛋白Pim1抗体Anti-CDH3 Antibody胰岛素样生长因子Ⅰ受体(IGF-ⅠR)ELISA试剂盒
蜡状芽孢杆菌磷酸化前病整合位点蛋白1抗体Anti-CDH4 Antibody胰岛素样生长因子1受体(IGF-R1)ELISA试剂盒
果生核盘菌肽基脯氨酞顺反异构酶Pinl抗体Anti-CDH3 Antibody胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)ELISA试剂盒
产气荚膜梭菌 素E型磷酸化肽基脯氨酞顺反异构酶Pinl抗体Anti-CDH5 Antibody血小板内皮粘附分子-1(PECAM-1/CD31)ELISA试剂盒
巴西固氮螺菌磷酸化孕受体抗体Anti-CDK1 Antibody血小板内皮粘附分子1(PECAM1)ELISA试剂盒
解鸟氨酸克雷伯氏菌磷酸化磷脂酰肌激酶(PI3Kβ)抗体Anti-CDK1 Antibody(PB0561)血小板/内皮粘附分子-1(PECAM-1/CD31)ELISA试剂盒
黑腐皮壳菌磷酸化蛋白磷酸酶2A(PP2Aα)抗体Anti-CDK2 Antibody(PB0562)血小板/内皮粘附分子1(PECAM1)ELISA试剂盒
葡萄酒色被孢霉丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶5抗体Anti-CDK2 Antibody血浆炎性趋化因子(CXCL9/MIG)ELISA试剂盒
大肠埃希菌蛋白激酶Cα相互作用蛋白1抗体Anti-CDK5 Antibody胸腺活化调节趋化因子(TAFA/CCL17)ELISA试剂盒
链格孢菌磷酸相互作用结构域蛋白1抗体Anti-CDK16 Antibody外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN/CD147)ELISA试剂盒
硫磺菌蛋白质磷酸酶2调节亚基1A抗体Anti-CDK4 Antibody凋亡因子配体(Fas-Ligand)ELISA试剂盒
地霉蛋白质磷酸酶2调节亚基1B抗体Anti-CDK4 Antibody(PB0563)糖蛋白130(gp130/CD130)ELISA试剂盒
酒红链霉菌蛋白质磷酸酶2调节亚基3A抗体Anti-CDK5 Antibody胎球蛋白A(Fetuin-A)ELISA试剂盒
胶孢蛋白质磷酸酶1B抗体(PP2Cβ)Anti-CDK5R1 Antibody胎球蛋白A(FetuinA)ELISA试剂盒
球孢白僵菌蛋白质磷酸酶1G抗体(PP2Cγ)Anti-CDK6 Antibody酸性成纤维生长因子(FGF1)ELISA试剂盒
亮白曲霉6磷酸果糖激酶1抗体Anti-CDK6 Antibody酸性成纤维生长因子(AFGF/FGF1)ELISA试剂盒
大豆内源基因Lectin检测试剂盒(荧光-PCR法)人载脂蛋白D(ApoD)酶联疫吸附测定试剂盒 Human LSM7 ELISA Kit整合素样金属蛋白酶与凝血酶4型抗体
人载脂蛋白E(ApoE)酶联疫吸附测定试剂盒 Human LSR ELISA Kit磷酸化活化复制因子2抗体
人载脂蛋白F(ApoF)酶联疫吸附测定试剂盒 Human LUC7L2 ELISA Kit磷酸化APP(Tyr757)淀粉样肽前体蛋白抗体
人载脂蛋白H(ApoH)酶联疫吸附测定试剂盒 Human LUC7L ELISA Kit丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶ATR抗体
人载脂蛋白M(ApoM)酶联疫吸附测定试剂盒 Human LTBP1(Latent-transforming growth factor beta-binding protein 1) ELISA Kit去整合素样金属蛋白酶18抗体
人碳酸酐酶VI(CA6)酶联疫吸附测定试剂盒Human LUZP1 ELISA Kit活化转录因子6抗体
人载脂蛋白A5(ApoA5)酶联疫吸附测定试剂盒 Human LXN ELISA Kit衔接蛋白β抗体
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
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