样本要求:
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
2.不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
公司产品仅供体外研究使用,不用于临床诊断!
产品名称
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低密度脂蛋白受体相关蛋白5试剂盒
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规格
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48T/96T
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货号
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BH-0012040
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保存条件:2-8℃(长期不使用时,部分试剂应放在-20℃条件下)。
有效期:6个月
存储运输:低温避光,请勿重压,轻拿轻放(现货供应,一般为快递运输,江浙沪隔天到,外地及偏远地方三至五天时间到货。)
Elisa试剂盒可测种属:人、大鼠、小鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛、羊、鸡、鸭、鱼等。
Elisa试剂盒适用范围:此试剂盒仅用于科研实验,禁用于临床。
2400 ng/L
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5 号标准品
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150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液
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1200ng/L
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4 号标准品
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150µl 的 5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
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600ng/L
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3 号标准品
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150µl 的 4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
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300ng/L
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2 号标准品
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150µl 的 3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
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150ng/L
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1 号标准品
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150µl 的 2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
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组成及试剂配制 :
1. 酶联板:一块(96孔)
2. 标准品(冻干品):2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为100 ng/ml,做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释)后,分别稀释成100 ng/ml,50 ng/ml,25 ng/ml,12.5 ng/ml,6.25 ng/ml,3.12 ng/ml,1.56 ng/ml,样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml,临用前15分钟内配制。
如配制50 ng/ml标准品:取0.5ml (不要少于0.5ml ) 100 ng/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3. 样品稀释液:1×20ml/瓶。
4. 检测稀释液A:1×10ml/瓶。
5. 检测稀释液B:1×10ml/瓶。
6. 检测溶液A:1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液A 1:100稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100ul/孔),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10ul检测溶液A加990ul检测稀释液A的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
7. 检测溶液B:1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。
8. 底物溶液:1×10ml/瓶。
9. 浓洗涤液:1×30ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10. 终止液:1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
样本收集及储存:
1. 细胞培养上清:
将细胞培养基移至无菌离心管,在 4℃条件下 1000 ×g 离心 10 min,然后将上清等量分装于小 EP 管并于-20℃下保存(24 小时内检测可放入 2-8℃储存),避免反复冻融。
2. 血清样本:
室温血液自然凝固 20 min 后,在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min,然后将上清等量分装于小 EP 管并于-20℃下保存(24 小时内检测可放入 2-8℃储存),保存过程中如有沉淀,请再次离心,避免反复冻融。
3. 血浆样本:
将全血收集到含抗血凝剂的管中,根据标本的实际要求选择 EDTA,柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合 20 min,在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min,然后将上清等量分装于小 EP 管并于-20℃下保存(24小时内检测可放入 2-8℃储存),避免反复冻融。
操作步骤:
实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。
1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液100μl(取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),37℃,60分钟。
3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。
4. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物素标记抗体工作液)100μl,37℃,60分钟。
5. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。
7. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后15分钟以内进行检测。
苹果酸脱氢酶小鼠血管活性肠肽Malate dehydrogenase
肉碱脂酰转移酶大鼠内素Carnitine palmitoyltransferase
脂肪甘油三酯水解酶大鼠过氧化物酶体增殖因子活化受体γTriglyceride hydrolase
脂联素小鼠甲状腺过氧化物酶adiponectin
过氧化物酶体增殖因子活化受体γ人癌胚铁蛋白Peroxisome Proliferator-activated receptor γ
β1-肾上腺素能受体抗体小鼠αL岩藻糖苷酶β1-adrenoceptor antibody
抗M2胆碱能受体抗体大鼠环孢素AAMCRA
线粒体肽蛋氨酸亚砜还原酶人鳞状癌相关抗原Mitochondrial peptide methionine sulfoxide reductase
淀粉磷酸化酶大鼠超敏C反应蛋白Starch phosphorylase
巴贝斯抗体人肿瘤特异性抗原babesia antibody
双芽巴贝斯抗体小鼠血管舒缓激肽Babesia bigemina antibody
钙激活中性蛋白酶1小鼠胰岛素原Calpain-1 catalytic subunit
神经激肽A人黑色素瘤转移表面黏附分子neurokinin A
乙醛脱氢酶大鼠β2糖蛋白1抗体IgA/G/Maldehyde dehydrogenase
乙醇脱氢酶人癌易感蛋白2Alcohol dehydrogenase
低密度脂蛋白受体相关蛋白5试剂盒四丁基氢氧化铵 ~40% 水溶液,离子色谱级2-氯-1,3-二甲基氯化咪唑鎓 90%Anti-CD56/NCAM1 神经粘附分子1抗体
2,4,5-三氯苯酚 分析标准品氯代二碳鎓六氟磷酸盐 98%Anti-CD171/NCAM-L1 神经粘附分子配体1抗体
甲基叔戊基 97%氯代三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐 98%Anti-CD172a/SIRP Alpha 信号调节蛋白α抗体
DL-α-酚琥珀酸酯 分析标准品多肽试剂TCTU 98%Anti-CD57 CD57抗体
基氧鎓四氟酸盐 96%2-氯-1,3-二甲基咪唑六氟磷酸盐 98%Anti-CD68 CD68抗体
(基硅烷基)重氮 2.0M 己烷溶液3-(二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-苯并三-4-酮 98% Anti-CD68 CD68抗体
三(2-氨基乙基) 97%代磷酸二乙酯 纯度 ≥90%Anti-CD69/CLEC2C/AIM 活化诱导分子CD69抗体
2-硫脲嘧啶 分析标准品2-(2-吡啶酮-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟酸盐 99%Anti-CD72/Ly-32 CD72蛋白抗体