支气管上皮细胞

培养方法

传代方法 将旧培养液吸除，PBS清洗两遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在显微镜下观察，期间禁止摇晃培养皿，细胞刚有脱落时，则吸除大部分胰酶，留约0.5mL，移至培养箱消化，约2min取出。传代用12mL CM1-1培养液终止消化，轻轻吹打均匀细胞，后可分3~6皿培养；

生长条件 37℃，5%CO2，CM1-1培养液。CM1-1培养液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培养液，含谷氨酰胺，含丙酮酸钠。

存储条件 冻存则用6mL冻存液（90%FBS+10%DMSO）终止消化，吹打均匀，分为6支冻存管，用程序降温盒于-80℃冻存，过夜转移至液氮中保存。

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培养操作步骤 ：

1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 

3．在距离紫外灯直射���围内20-30 厘米处照射2-3小时； 

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中； 

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及细胞化学检测。 

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

保存条件  Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.

Important Note  This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, thought to form multiprotein networks in the cell membrane in association with multiple protein partners. Tetraspanins have functional roles in cell motility, membrane fusion, proliferation, and adaptive immunity. This gene is one of several tumor-suppressing subtransferable fragments located in the imprinted gene domain of 11p15.5, an important tumor-suppressor gene region. Alterations in this region have been associated with the Beckwith-Wiedemann syndrome, Wilms tumor, rhabdomyosarcoma, adrenocortical carcinoma, and lung, ovarian, and breast cancer. PHEMX may play a role in malignancies and disease that involve this region as well as hematopoietic cell function. There are 5 isoforms produced by alternative splicing.

Subcellular Location : Membrane; Multi-pass membrane protein

Tissue Specificity : Expressed ubiquitously at low levels. High levels of expression are confined to hematopoietic tissues including peripheral blood leukocytes, thymus and spleen.

Similarity : Belongs to the tetraspanin (TM4SF) family.

Database links : UniProtKB/Swiss-Prot: Q96QS1.1

英文名称  Anti-PIP5KL1/PIPKH

中文名称  4-磷酸磷脂酰肌醇5激酶1样蛋白抗体

别    名  bA203J24.5; EC 2.7.1.68; MGC46424; phosphatidylinositol 4 phosphate 5 kinase like 1; phosphatidylinositol phosphate kinase homolog; Phosphatidylinositol-4-phosphate 5-kinase-like protein 1; PI(4)P 5 kinase like protein 1; PI(4)P 5-kinase-like protein 1; PI5L1_HUMAN; PIP5KL1; PIPKH; PtdIns(4)P 5 kinase like protein 1; PtdIns(4)P-5-kinase-like protein 1.

浓    度  1mg/1ml

规 格  0.2ml/200μg

抗体来源  Rabbit  

克隆类型  polyclonal

交叉反应  Human, Mouse, Rat, Dog, Cow, Horse, Rabbit  

产品类型  一抗    

研究领域  肿瘤 细胞生物 信号转导 细胞骨架  
支气管上皮细胞胃蛋白酶原A检测试剂盒二苯偶氮碳酰肼 AR,40%中型货架 2000*600*2000mm 四层

胃动素检测试剂盒二苯偶氮碳酰肼 >60%(HPLC)中型货架 2000*600*2000 六层

胃泌素检测试剂盒二苯偶氮碳酰肼 95%钴酸锂 99.8% metals basis

胃泌素17检测试剂盒玫瑰红银试剂  AR，91%聚乙烯1788型 解度：87.0～89.0%(mol/mol)

胃泌素17检测试剂盒玫瑰红银试剂  98%聚乙烯1797型 解度：96.0～98.0%(mol/mol)

胃泌素释放肽前体检测试剂盒丁二酮肟 AR，98%聚乙烯1799型 解度：99.8～100%(mol/mol)

胃粘液素检测试剂盒丁二酮肟 ACS聚乙烯1795型 解度：94.0～96.0%(mol/mol)

实验要点及说明：

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 

2．所使用的盖玻片应该为玻璃**，并经过铬酸洗液处理； 

3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 

4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 

5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。