肾足细胞

培养方法

传代方法 将旧培养液吸除，PBS清洗两遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在显微镜下观察，期间禁止摇晃培养皿，细胞刚有脱落时，则吸除大部分胰酶，留约0.5mL，移至培养箱消化，约2min取出。传代用12mL CM1-1培养液终止消化，轻轻吹打均匀细胞，后可分3~6皿培养；

生长条件 37℃，5%CO2，CM1-1培养液。CM1-1培养液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培养液，含谷氨酰胺，含丙酮酸钠。

存储条件 冻存则用6mL冻存液（90%FBS+10%DMSO）终止消化，吹打均匀，分为6支冻存管，用程序降温盒于-80℃冻存，过夜转移至液氮中保存。

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培养操作步骤 ：

1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中； 

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及细胞化学检测。 

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

Contains 1 AGC-kinase C-terminal domain.

Contains 1 PH domain.

Contains 1 phorbol-ester/DAG-type zinc finger.

Contains 1 protein kinase domain.

Contains 1 REM (Hr1) repeat.

英文名称  Anti-phospho-PRKAA2(Ser173)

中文名称  磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶α2抗体

别    名  PRKAA2(phospho S173); AMPK 2; AMPK2; AMPKalpha2; PRKAA 2; PRKAA; PRKAA2; Protein kinase AMP activated alpha 2 catalytic subunit.

浓    度  1mg/1ml

规 格  0.1ml/100μg

抗体来源  Rabbit  

克隆类型  polyclonal

交叉反应  Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Horse, Rabbit

产品类型  一抗  磷酸化抗体   

研究领域  肿瘤 学 信号转导 激酶和磷酸酶  

蛋白分子量  predicted molecular weight: 61kDa

性    状  Lyophilized or Liquid

免 疫 原  KLH conjugated Synthesised phosphopeptide derived from human PRKAA2 around the phosphorylation site of Ser173
肾足细胞转铁蛋白受体检测试剂盒氯, 含稳定剂铜, 97%钌粉 99.99% metals basis

转酮酶检测试剂盒3-氯-1- 98%三氯化铑，水合 Rh 38.5-42.5%

转移因子检测试剂盒环己烯  ≥99.0% (GC)铑 99.9%

自然杀伤检测试剂盒环己烯 CP,98.0% 铑黑 99.9% metals basis

自噬基因Beclin 1检测试剂盒庚二酸 99%铑碳催化剂 铑含量 (wt%) ，5%

总UL16结合蛋白检测试剂盒鞣花酸 96%氧化钌 99.9% metals basis

总β淀粉样蛋白检测试剂盒没食子酸，一水物 AR,98.5%氧化钌(IV) 水合物  钌含量75%

实验要点及说明：

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 

2．所使用的盖玻片应该为玻璃**，并经过铬酸洗液处理； 

3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 

4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 

5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。