冷冻保存细胞之方法
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase长期储存。-20 ℃不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
产品名称
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乳腺上皮细胞
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规格
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5×105
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货号
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BH-X019847
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细胞培养的优点:
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
培养操作:
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加入血清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.
Subcellular Location : Secreted.
Similarity : Belongs to the NPY family.
Database links : UniProtKB/Swiss-Prot: P10082.3
酪酪肽简介
酪酪肽PYY又称肠道衍生酪酪肽,属胰多肽家族成员,因它可使机体产生饱感、减少摄食和体重而为人们所知。随着进一步的深入研究,又发现其具有多种生物功能。
1、 PYY的蛋白结构:PYY与胰多肽(PP)和神经肽Y(NPY)具有较高的序列同源性,故认为属胰多肽家族 。PYY是一种具有酰胺化羧基末端的肽类物质,为直链多肽,其分子结构为36个氨基酸缩合而成该肽的氨基和羧基末端的氨基酸残基均为酪氨酸(Tyrosine,Tyr)。在循环系统中,PYY以PYY1-36 和PYY3-36两种形式存在 。
2、 PYY的分泌及影响因素: PYY主要由结肠和直肠的L细胞以和旁分泌两种方式分泌;
a.初期PYY是由结肠的细胞所产生,该与胃肠道的形成和发育过程具有一定的关系。
b.PYY也可以由胃和胰腺的细胞所分泌,同时在神经系统(下丘脑、脑干、髓质、脑桥和脊髓)和末梢神经系统的神经元中存在。
c.在胰腺内,PYY主要和胰高血糖素在胰岛的α细胞内共同表达。PYY在初期胰岛细胞前体中的表达,说明它在胰腺的分化增殖和发育过程中起了重要的作用,从两栖类动物的皮肤中也分离出一种PYY,称为S-PYY。
3、PYY的作用:
a.抑制胰岛素的分泌:在体内和体外实验中PYY可以抑制胰岛素的分泌。PYY是间接通过减少胰高血糖素的作用来影响胰岛素的分泌。由于胰岛素和PYY都是由胰岛的β细胞分泌,因此,PYY可能是经过旁分泌方式来调节胰岛素的分泌,但胰高血糖素和PYY是否一起被分泌还需要进一步的研究。
b.PYY还可以通过作用于神经系统来抑制胰岛素的分泌。PYY可能与脑干内的Y1和Y2受体结合来调节迷走神经和影响摄食功能,这其中就包括调节胰岛素的分泌。
c.抑制胃酸分泌:PYY 可以抑制由五肽胃泌素、胆碱能激动剂、刺激迷走神经和组织胺所引起的胃酸分泌以及减少胃蛋白酶的含量,同时还可以增加血液中PYY的浓度。
d.PYY对摄食行为的调节: PYY的浓度在摄食前下降和摄食后增加,表明PYY是一个调节摄食的饱感信号。
英文名称 Anti-PFKL/Fructose 6 Phosphate Kinase
中文名称 6磷酸果糖激酶抗体
别 名 Fructose 6 Phosphate Kinase 6 Phosphofructokinase Muscle Type; GSD7; PFKA; PFK-A; PFKL; PFKM; PFKP; PFKX; Phosphofructo 1 Kinase Isozyme A; Phosphofructo-1-kinase isozyme A; Phosphofructokinase 1; Phosphofructokinase M; Phosphofructokinase-M; Phosphofructokinase, muscle; Phosphofructokinase, muscle type; Phosphofructokinase, polypeptide X; Phosphohexokinase; K6PF_HUMAN; 6-phosphofructokinase, muscle type.
乳腺上皮细胞基质金属蛋白酶14检测试剂盒氧化铌 99.95%,冶金级聚乙烯亚 M.W. 10,000, 99%
状瘤病16抗体检测试剂盒氧化铌 SP聚乙烯亚 M.W. 70,000, 50%水溶液
状瘤病18抗体检测试剂盒氧化钽 SP无水哌 99%
抗Sa抗体检测试剂盒氧化钽(V) 99.99% metals basis,用于光学玻璃或单晶三乙烯二 98%
球蛋白G Fc段受体Ⅰ检测试剂盒氧化钽(V) 99.5%2-氨基-4-氯苯甲酸 98%
球蛋白G Fc段受体Ⅱ检测试剂盒氧化钽(V) 99.99% metals basis,<2 μm,用于镀膜3,5-二(三氟甲基)苯 98%
性休克综合征素1检测试剂盒钽杆 diam. 3 mm, ≥99.95% metals basis2-氯-6-氟苯甲 98%
细胞处理方法:
以下细胞处理方法及细胞说明书仅供参考,具体操作还需要根据到货时细胞密度,细胞生长状态等具体情况,酌情处理,如需要更详细技术指导。
一.贴壁细胞
客户接收到细胞,用75%的酒精(建议配制75%酒精的水是过的)培养瓶外部。
肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张)。
显微镜观察细胞,当细胞融汇至80%左右(可以传代的情况下),细胞应该在37度培养箱预温1-2h后再做处理。如未达到细胞传代密度,培养瓶应预留一部分培养基继续培养。
严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出(严禁直接倾倒),放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。
用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面,加入适量的0.05%胰酶-EDTA消化细胞,显微镜下观察细胞变圆,轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落,加入终止液终止。1000rpm,5min离心,重悬细胞。换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2 培养。
二.悬浮细胞
1. 接收到细胞,用75%的酒精(建议配制75%酒精的水是过的)培养瓶外部。
2. 肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张)。
3. 严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
4. 将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出(严禁直接倾倒)。
5. 1000rpm,5min离心,重悬细胞。 换新的细胞培养瓶和新鲜培养基,37℃,5%CO2培养。