胸腺成纤维细胞

培养方法

传代方法 将旧培养液吸除，PBS清洗两遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在显微镜下观察，期间禁止摇晃培养皿，细胞刚有脱落时，则吸除大部分胰酶，留约0.5mL，移至培养箱消化，约2min取出。传代用12mL CM1-1培养液终止消化，轻轻吹打均匀细胞，后可分3~6皿培养；

生长条件 37℃，5%CO2，CM1-1培养液。CM1-1培养液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培养液，含谷氨酰胺，含丙酮酸钠。

存储条件 冻存则用6mL冻存液（90%FBS+10%DMSO）终止消化，吹打均匀，分为6支冻存管，用程序降温盒于-80℃冻存，过夜转移至液氮中保存。

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培养操作步骤 ：

1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板��每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中； 

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及细胞化学检测。 

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

产品介绍 PHD2 protein catalyzes the posttranslational formation of 4-hydroxyproline in hypoxia-inducible factor (HIF) alpha proteins. In the presence of oxygen, PHD2 converts specific prolyl residues in HIF alpha to hydroxyproline, leading to HIF alpha proteasomal degradation via the von Hippel-Lindau ubiquitylation complex. Low oxygen levels, sensed at the cellular level, cause the HIF conversion to be reduced so that HIF levels are stable. This results in increased angiogenesis as HIF1 alpha regulates the expression of many angiogenesis-related genes.

Subcellular Location : Cytoplasm. Nucleus.

Tissue Specificity : According to PubMed:11056053, widely expressed with highest levels in skeletal muscle and heart, moderate levels in pancreas, brain (dopaminergic neurons of eart, brain, lung and liver and fetal brain, heart spleen and skeletal muscle.

Similarity : Contains 1 Fe2OG dioxygenase domain.

Contains 1 MYND-type zinc finger.

英文名称  Anti-PML/TRIM19

中文名称  早幼粒细胞白血病蛋白抗体

别    名  PML Protein; MYL; PML; PML_HUMAN; PP8675; Probable transcription factor PML; Promyelocytic leukemia; Promyelocytic leukemia inducer of; Promyelocytic leukemia protein; Protein PML; RING finger protein 71; RNF 71; RNF71; TRIM 19; TRIM19; Tripartite motif containing protein 19; Tripartite motif protein TRIM19; Tripartite motif-containing protein 19.

浓    度  1mg/1ml

规 格  0.2ml/200μg

抗体来源  Rabbit  

克隆类型  polyclonal

交叉反应  Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow

产品类型  一抗    

研究领域  肿瘤 细胞生物 学 细胞凋亡 细胞周期蛋白 转录调节因子  

蛋白分子量  predicted molecular weight: 97kDa

性    状  Lyophilized or Liquid

免 疫 原  KLH conjugated synthetic peptide derived from human PML/TRIM19
胸腺成纤维细胞膳食纤维检测试剂盒N-苯甲酰基-L-精氨酸乙酯盐酸盐 98%4-羟基-3-甲基吡啶 97%

膜联蛋白-V检测试剂盒2-溴芴 97%异喹诺酮 98%

生激表达基因2蛋白检测试剂盒2,2'-联喹啉-4,4'-二甲酸二钠 98%3-甲基-4-氨基吡啶 98%

Artemin蛋白检测试剂盒N,N-双(2-羟乙基)甘氨酸 BC 甲基吡咯-2-羧酸酯 98%

5羟色2B受体检测试剂盒CAPSO单钠盐 99%1-甲基咪唑-5-甲酸 95%

胰高血糖素样肽检测试剂盒3-(环已)-2-羟基-1- 99%对异酸酯 98%

微囊藻素检测试剂盒3-(环已)-2-羟基-1- 99.5%4-硝基吡唑 97%

实验要点及说明：

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 

2．所使用的盖玻片应该为玻璃**，并经过铬酸洗液处理； 

3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 

4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 

5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。