NAD-苹果酸酶（NAD-ME）

样品制备：

1）. 直接或稀释使用清亮无色中性液体样品，体积可达2.000ml。

2）. 过滤混浊溶液。

3）. 除去样品中的CO 2 （通过过滤）。

4 ）. 通过加氢氧化钾或氢氧化钠将酸性样品的PH值调至8.0。

5 ）. 调整酸性浅色样品的PH值至8.0，孵育约15分钟。

6 ）. 用空白样品做对照测定有色样品（如有必要调整PH值至8.0）。

7 ）. 用PVPP（ 聚乙烯吡咯烷酮）或聚酰胺处理深色未经稀释或体积更大的样品。

8 ）. 压碎、搅匀固体或半固体样品，用水溶解提取。

9 ）. 用Carrez试剂将含有蛋白质的样品去蛋白。

10）.含脂肪的样品用热水提取。

【友情提示】：本产品��供科研研究使用，不得用于人体临床直接检测。避免给您带来不必要的损失，请仔细阅读购买说明！

通用规则：

1、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。

2、液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。

3、底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免接触。

4、检测前，要打开酶标仪，使之稳定10分钟以上。

5、吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。

6、将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。

7、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。

8、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加彻底。没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。

9、用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。

10、底物是光敏感的，要在临用前现配。

优点如下：

1、快速简便：全程约50分钟，可测100例左右样本。

2、取样量微：本法取手指或耳垂等末梢血20ul～50ul即可测红细胞中的SOD，只需2ml静脉血可测白细胞中的SOD及血小板中SOD，只需50mg左右组织就可测组织匀浆、胞浆中的SOD，0.2g组织可测线粒体及微粒体中的SOD。

3、灵敏度高：IC50=0.05g/ml，是邻苯三酚法的18倍。

4、稳定性好：试剂盒2～8℃存放6个月有效。

5、再现性好：变异系数CV=1.7%。

6、回收试验： X =103.3%。

7、受外界影响因素小：干扰因素少，重复性强。

8、测试面广：可测动物血液、组织、各种体液、灌流液等、各种培养细胞、植物组织、各种水产以及化妆品、保健品等，效果均佳.

测定步骤：

1.加样

1. 除包被外都需45度加样

2.加样体积要准确

3.管底加样，不能加在管壁上

4.加样时不能产生气泡

2.温浴

1.加标本后和加结合物后，应立即放入按规定的反应温度的水浴箱。

2.各ELISA板不应叠在一起。

3.为避免蒸发，板上应加盖，或将板平放在底部垫有湿纱布的金属湿盒中。

4.加入底物后，反应的时间和温度通常不做严格要求。 如室温高于20℃，ELISA板可避光放在实验台上，以便不时观察，待对照管显色适当时，即可终止酶反应。

3.洗涤

1.洗涤在ELISA过程中不是反应步骤，但却是决定实验成败的关键。

2.目的是洗去反应液中没有与固相抗原或 抗体结合的物质以及在反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质。

4.读板

1.阴性对照颜色极浅，在定性测定中一般可采用目视比色。

2.如用酶标仪测定结果，准确性决定于ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质量和软件的算法。
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