汉滩型汉坦病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒说明书

样本处理及要求：

1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3.组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

4.细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

试剂盒组成及试剂配制：

1.  酶联板（Assay plate ）：一块（96孔）。 

2. 标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。

3. 样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶

4. 生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

6. 生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

7. 辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。 

9. 浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 

10. 终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

样本采集、存放及运输：

1、样本采集：各类型样本按照常规方法采集；

2、存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（zui多冻融3次）；

3、运输：采用泡沫箱加冰密封进行运输。

注意事项:

1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

2.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

3.请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔di一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。

4.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5.底物请避光保存。

6.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

7.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

8.本试剂不同批号组分不得混用。

9.不能使用过期产品。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。