细胞接收后的处理：
1）收到细胞后，75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。
3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议T25培养瓶1：2传代。
英文简称
规格
货号
L Wnt-3A:L Wnt3A
1×106
P-X1070
产品详情：
生长特性 贴壁细胞
细胞形态 成纤维细胞样
生长培养基 DMEM＋0.4mg/ml G418＋10% FBS＋1% P/S
冻存条件
冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO
温度：液氮
培养条件
气相：空气，95%；CO2，5%
温度：37℃
推荐传代比例 1:3-1:4
推荐换液频率 2~3次/周
背景描述 L Wnt-3A细胞是由L-M(TK-)细胞用Wnt-3A表达载体转染并在含G418的培养基中筛选出的稳转株。Wnt-3A基因编码一个有变异的信号功效分泌性糖蛋白，Wnt基因控制胚胎发过程中的许多模式形成和生长事件。L Wnt-3A细胞分泌有生物活性的Wnt-3A蛋白，L Wnt-3A细胞是目前生产Wnt-3A条件培养基的好来源。由于这种条件培养基还包含Wnt-3A蛋白外的其他因子，对于涉及Wnt-3A条件培养基的实验有必要用其来源细胞株作对照。
年龄（性别） 雄性，100日龄
组织来源 组织：皮下结缔组织；疏松结缔组织及脂肪；品系：C3H/An
细胞类型 自发永生化细胞
生物等级 1
基因表达情况 Wnt-3A
保藏机构 ATCC; CRL-2647
干冰运输及复苏好存活细胞
（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
1）准备DMEM培养基；胎牛血清，10%；双抗，1%。
2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
二．细胞处理：
1）冻存细胞的复苏：：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜
。天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3）细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例：
1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml.
2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。
3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
实验原理：
公司正在出售的产品：
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半椎蛋白2抗体 |
清道夫受体B2抗体 Scavenger Receptor BII |
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HMCN2 |
孕受体单克隆抗体 Progesterone Receptor |
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ABI基因家族2抗体 |
INTS5蛋白抗体 INTS5 |
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ABI3 |
HAUS8蛋白抗体 HAUS8 |
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着丝粒蛋白36抗体 MSL1v1/CENP36 |
染色质修饰蛋白2B抗体 CHMP2B |
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复制因子A蛋白2 RPA32 |
细胞色素P450 19抗体 Aromatase |
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钙激活钾通道蛋白β2抗体 KCNMB2 |
TRM11蛋白抗体 TRM11 |
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细胞核转录因子X盒结合蛋白抗体 XBP1 |
ZC3H12C蛋白抗体 ZC3H12C |
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DHPR受体蛋白共沉淀分析试剂盒 |
ALDH3A2抗体 ALDH3A2 |
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葡萄糖氧化酶（GOD）测试盒 |
APC标记小鼠CD45.2单克隆抗体 mouse CD45.2/APC |
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核酸蛋白结合凝胶迁移电泳分析（EMSA）试剂盒 |
卷曲螺旋结构域蛋白28A抗体 CCDC28A |
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小鼠二肽基肽酶4(DPP4)elisa检测试剂盒 |
连接粘附分子1抗体 JAM1 |
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人表皮生长因子(EGF)elisa检测试剂盒免费代测 |
小鼠抑制素A（INH-A）elisa检测试剂盒 |
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12-羟基二十四烯酸（12-HETE）高效液相色谱法定量检测试剂盒 |
L Wnt-3A小鼠皮下结缔组织细胞大鼠硫酸乙酰肝素蛋白多糖2(HSPG2)elisa检测试剂盒 |
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大鼠D-乳酸elisa检测试剂盒 |
人Ⅲ型前胶原氨基末端肽(PⅢNP)elisa分析检测试剂盒 |
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小鼠磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC-3)elisa检测试剂盒 |
通用型血液对氧磷酶1（PON1）有机磷酸酶活性比色法定量检测试剂盒 |
实验步骤：
1 将目的基因构建到合适的慢病毒载体上，利用293T细胞进行慢病毒包装，获得含目的基因的慢病毒；
2 转染前24 h进行细胞铺板，转染时细胞密度控制在80%左右；
3 天加入适量病毒悬液感染细胞，并置于37 ℃，5% CO2培养箱中孵育；
4 24 h后用新鲜培养基替换含有病毒的培养基，并继续培养；
5 在转染3-4天后开始加药筛选培养，直至显微镜下观察荧光细胞比例为100%，获得稳转细胞系。
