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ELISA标曲显色过强无明显梯度分析

ELISA标曲显色过强无明显梯度分析:

1、主要怀疑点:洗板不充分:

1.1、机器洗版:确保机器设置的针头能吸干孔中液体,并且加液针头能加液大于350ul,加液针头没有被异物或者结晶盐堵住。

1.2、手动洗板,严格按照步骤,使用干净灭 jun 的枪头和加样槽,使用无氧化剂的吸水纸。加350ul洗液,静置90秒,在吸水纸上拍干孔中液体后再加入下一步洗液或者试剂。

1.3、特别注意,在加入TMB前的洗板步骤极其重要,残留的HRP酶会直接导致TMB显色。

2、次要怀疑点:

2.1、TMB 已经污染,检测TMB是否透明无色,如果偏蓝就是污染了。

2.2、检查配制洗液的水是否污染,要求使用的水是双蒸水,三蒸水或无离子水,水中的Fe3+,Cu3+,Co3+等过渡金属,以及HClO都会氧化TMB。

2.3、酶标板受潮,长霉,或者试剂过期。

2.4、环境污染,空气中有导致显色的物质或者粉尘。