大鼠血纤蛋白原(Fbg)ELISA试剂盒操作步骤:
1、包被:用PH9.6的CBS包被液稀释包被抗原至5μg/ml,酶标板中每孔加入50μl,室温、4℃或37℃过夜包被。
2、洗涤:弃包被液(用力拍干,再用无尘纸吸干),用PH7.2-7.4的1×PBST洗涤液洗板3次(每孔均要加满),每次3min~5min。
3、封闭:每孔加封闭液(1%BSA)250μl,37℃封闭2h。
4、洗涤:用1×PBST洗涤液洗板3次,每次3min~5min。
5、结合一抗:用1×PBST缓冲液1∶1000稀释被检血清,每孔100μl,要设立阴性对照,37℃孵育1.5h。
6、洗涤:同上。
7、结合酶标二抗:每孔加1×PBST缓冲液1000倍稀释的酶标二抗羊抗鼠IgG-HRP(稀释倍数根据产品不同有所不同,可按说明书进行)50μl,37℃孵育1h。
8、洗涤:同上。
9、显色:每孔加底物溶液(TMB)50μl,置室温避光显色10min。
10、待显色后,每孔加入50μl终止液(2mol/L H2SO4)终止反应。使用酶标仪读取450nm的OD值,以确定血清抗体水平。