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小鼠骨桥素(OPN)ELISA试剂盒实验操作步骤

小鼠骨桥素(OPN)ELISA试剂盒实验操作步骤:


   1.使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。


   2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。


   3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。


   4.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。


   5.每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。


   6.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。


   7.每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。


   8.取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。


   9.在450nm波长处测定各孔的OD值。