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德氏乳杆菌操作步骤

德氏乳杆菌操作步骤

一、冻存

1、消化细胞(同实验二),将细胞悬液收集至离心管中。

2、1000rpm离心10分钟,弃上清液。

3、沉淀加含保护液的培养,计数,调整至5×106/ml左右。

4、将悬液分至冻存管中,每管1 ml。

5、将冻存管口封严。如用安瓿瓶则火焰封口,封口一定要严,否则复苏时易出现爆裂。

6、贴上标签,写明细胞种类,冻存日期。冻存管外拴一金属重物和一细绳。

7、按下列顺序降温:室温→4℃(20分钟〕→冰箱冷冻室(30分钟)→低温冰箱(-30℃ 1小时)→气态氮(30分钟)→液氮。

注意:操作时应小心,以免液氮冻 伤。液氮定期检查,随时补充,不能挥发干净,一般30立升的液氮能用1~1.5月。

二、复苏

1、准备一个茶缸或1000ml的烧坏,内装2/3杯37℃的温水。

2、从液氮中取出冻存管、迅速置于温水中并不断搅动。使冻存管中的冻存物在1分钟之内融化。

3、打开冻存管,将细胞悬液吸到离心管中。

4、1000rpm离心10分钟,弃去上清液。

5、沉淀加10ml培养液,吹打均匀,再离心10分钟,弃上清液。

6、加适当培养基后将细胞转移至培养瓶中,37℃培养,第2天观察生长情况。