PCR反应产物量过少分析:
(1)退火温度不合适。以2度为梯度设计梯度PCR反应优化退火温度。
(2)DNA模板量太少。增加DNA模板量。
(3)PCR循环数不足。增加反应循环数。
(4)引物量不足。增加体系中引物含量。
(5)延伸时间太短。以1kb/分钟的原则设置延伸时间。
(6)变性时间过长。变性时间过长会导致DNA聚合酶失活。
(7)DNA模板中存在抑制剂。确保DNA模板干净