解决qPCR无Ct信号出现现象:
1、反应循环参数不够,一般要在35个循环以上,但是过多的循环次数可增加背景值。
2、检测荧光信号的步骤有误。SYBRgreen法(SG法)采用的是72延伸时采集荧光信号,taqman法则是在退火结束或延伸结束时进行信号采集。
3、引物或探针降解,可用PAGE电泳检测其完整性,若是电泳条带呈弥散状,可考虑重新合成引物或探针。
4、模板不足或降解,则可以重新提取核酸模板。