氧化节杆菌操作步骤:
1. 事先将恒温水浴的温度调到42℃。
2. 从-70℃ 超低温冰柜中取出一管(100 μl)感受态菌,立即用手指加温融化后插入冰上,冰浴5~10 min。
3. 加入5 μl 连接好的质粒混合液(DNA含量不超过100 ng),轻轻震荡后放置冰上20 min。
4. 轻轻摇匀后插入42℃水浴中1~2 min进行热休克,然后迅速放回冰中,静置3~5 min。
5. 在超净工作台中向上述各管中分别加入500 μl LB培养基(不含抗jun素)轻轻混匀,然后固定到摇床的弹簧架上37℃震荡1 h。
6. 在超净工作台中取上述转化混合液100-300 μl,分别滴到含合适抗jun素的固体LB平板培养皿中,用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。
7. 如果载体和宿主菌适合蓝白斑筛选的话,滴完菌液后再在平板上滴加40 μl 2% X-gal,8 μl 20% IPTG,用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。
8. 在涂好的培养皿上做上标记,先放置在37℃恒温培养箱中30~60 min 直到表面的液体都渗透到培养基里后,再倒置过来放入37℃恒温培养箱过夜。
9. 在被xi菌污染的桌面上喷洒70%乙醇,擦干桌面,写实验报告。
10. 观察平板上长出的菌落克隆,以菌落之间能互相分开为好。注意白色菌斑。