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ELISA检测阴性对照(品)的概念与要求
ELISA检测,按照试剂说明书要求,每次试验、每块扳上都要设置
阴性对照(品)
对照。
1、阴性对照(品)的概念与要求:
所谓阴性对照(品),应当是本项检测试验中采用与待捡物(样品、人用试剂就是人的血清等)具有同源性和同质性,又不含有待检物质,并能客观比较和鉴别处理因素(血清免 疫学试验中有特异性抗原与抗体反应)之间的差异。因此,用动物血清或其制品(如牛血清白蛋白等)代替阴性人血清作为对照品,从理论和实践上都是不可取的,弊端甚多,无须细述。注意:据我所知,国产ELISA试剂中,有的厂牌是用动物血清制品稀释配置、或与部分人血清混合配置的;其二,阴性对照读数,并非是“越低越好"。NCx值接近0.00X水平,这是假象!试想一下,真正采用“阴性人血清"的阴性对照品,NCx值会如此之低吗?举个例子,雅培乙肝六项EIA试剂的NCx值,分别为:0.010(HBsAg)、0.027(抗—HBs)、0.035(HBeAg)、1.083(抗—HBe)、1.065(抗—HBc)、0.045(抗HBc-IgM)。生物梅里埃的HIV试剂NCx是0.091。辨别试剂NCx值是否合理的一个很简单的方法,只要对比大量阴性样本的实际读数就“一目了然"啦!
一个题外插曲:表明ELISA试剂内在质量的一个重要统计标志,就是要看:阴性样本的的上限不应当大于、必须小于C.O.I.=1.00;反之,阳性样本的的下限不可小于、应当大于C.O.I.=1.00!早年我用SPSS软件输出阿克苏HIV和国产甲、乙试剂检测600例左右的健康人体检血清的三幅直方图,可以表明阴性样本的不同分布特征,颇有意思。
我为什么要如此细说NCx呢?因为NCx值在Cut off值计算中是相当举足轻重的(详后)。
2、阴性对照(品)分为两类
一是代表受检人血清中并不含有、或方法学灵敏度未能检出的待检物的基准水平,并且是结果判断值(Cut off)计算式中决定“是"(阳性)、或“否"(阴性)的唯 1可变值。阴性对照值高,导致假阴性;反之,导致假阳性。如:HBsAg、HBeAg、抗—HBc等。二是阴性对照设置,在方法学上要求加入指示性定量标准品,如中和剂HBeAg,定量HBcAg等,用以检测抗—HBe、抗—HBc。或者,选取代表平均水平的正常人血清用作阴性对照,如检测抗—HBc IgM。此类Cut off 值计算时,多数均包括阴性和阳性对照值2个可变值。
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