下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤:
1、在无抗生 素的培养基中消化、计数和稀释细胞,稀释到常规细胞传代的浓度。
2、分散细胞悬液到多孔培养板中,或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内,把选择抗生 素加入到每一个孔中。例如,两性霉素B推荐下 列浓度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/ml。
3、每天观测细胞毒性指标,如脱落,出现空泡,汇合度下降和变圆。
4、确定抗生 素毒性水平后,使用低于毒性浓度2~3倍浓度的抗生 素的培养液培养细胞2~3代。
5、在无抗生 素的培养基中培养细胞一代。
6、重复步骤4。
7、在无抗生 素的培养基中培养4~6代,确定污染是否以已被消除。