圣路易斯脑炎病毒PCR检测试剂盒

产品及特点：
1. 即开即用，用户只需要提供病毒样品。
2. 根据保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量PCR检测，避免后续污染。
5. 本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。
本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
参数规格：
产品名称：圣路易斯脑炎病毒PCR检测试剂盒
产品规格：50T
产品货号：FS-P63550
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
产品特点：本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。
运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限一年。
自备试剂
DNA模板、10×ROX（根据机型决定，具体见使用方法）。

实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
使用方法：
一、稀释PCR阳性对照（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）
1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
2. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
8. 如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号（浓度为1×10E4 拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝）或第5号（浓度为1×10E5 拷贝/μL，10μL相当于10万拷贝）再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品，则PC和NC的体积也必须是200μL。
9. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。
三、设置qPCR反应（20 μL体系，在样品制备室进行）
10. 如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复，则反应设置数量相应增加2或3倍。
11. 产品仅用于科研在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后加）

钾标准溶液(1000µg/mL,基体:1%HCl)  Potassium Solution 2023695 质量规格：1000µg/mL,基体:1%HCl

甲基多巴(标准品) L-Methyldopa 41372-08-1 质量规格：含量测定

分散蓝 35(标准品) Disperse Blue 35 12222-75-2 质量规格：分析标准品

盐酸育亨宾（标准品） Yohimbine HCl 65-19-0 质量规格：HPLC≥98%，标准品

胃蛋白酶(1:3000) PEPSIN 9001-75-6 质量规格：1:3000,BR

磷酸氢二钠,二水(for HPLC, ≥99%(T)) Sodium phosphate dibasic dihydrate 10028-24-7 质量规格：for HPLC, ≥99%(T)

PLX4720 PLX-4720 918505-84-7 质量规格：>98%，B-RafV600E抑制剂

细胞ERK1激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C） 进口/国产 规格：20次

3,4,5,6-四氯荧光素 3,4,5,6-Tetrachlorofluorescein 6262-21-1 质量规格：荧光染料

冰冻切片组织DHPR受体蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 进口/国产 规格：10/20次

隐色孔雀石绿（标准品） Leucomalachite Green 129-73-7 质量规格：分析标准品

蛋白电泳丽春红染色试剂盒 进口/国产 规格：10次

石蜡切片组织衰老特异性脂褐素靛酚原位直接染色试剂盒 进口/国产 规格：50次

N-去甲基长春花碱 N-Desmethyl Vinblastine 18172-50-4 质量规格：美国进口

组织SPRK1激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C） 进口/国产 规格：20次

人体p16基因甲基化检测试剂盒 进口/国产 规格：20次

圣路易斯脑炎病毒PCR检测试剂盒PBS，（10X）    pH 7.470011-044

Fluid A    

营养肉汤（NB）颗粒 英文名称：Nutrient Broth 产品规格：250g 产品用途：一般细培养、转种、复壮、增等用途:用于一般细培养、转种、复壮和增等。成分(g/L)蛋白胨 10.0牛肉浸粉 3.0氯钠 5.0pH值7.2 ± 0.2 25℃使用方法取一袋培养基,加入 300ml 蒸馏水中,加热搅拌溶解,121℃高压灭 15 分钟,备用。

营养琼脂（NA）颗粒 英文名称：Nutrient Agar 产品规格：250g 产品用途：细计数、不含糖，可作血琼脂基础和传代用用途：用于一般细培养、转种、复壮和增等成分(g/L)蛋白胨 10.0牛肉粉 3.0氯钠 5.0琼脂 15.0pH值7.3 ± 0.1 25℃用法：称取本品 33.0g ,加热溶解于 1000ml 蒸馏水中,分装三角瓶 ,121℃高压灭 15分钟,备用。

含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆琼脂（TSA-YE）颗粒 英文名称： 产品规格：300ml*10 产品用途：用于单增李氏的分纯，培养用途:用于单增李斯特氏的分纯培养,也可用于做 7% 羊血琼脂。成分(g/L)胰蛋白胨 17.0多价胨 3.0酵母浸粉 6.0氯钠 5.0磷酸氢二钾 2.5葡萄糖 2.5琼脂 15.0pH值 7.3 ± 0.1

平板计数琼脂（PCA）颗粒 英文名称：Plate Count Agar 产品规格：300ml/袋*10 产品用途：国际标准平板计数琼脂，含糖，用于细总数的测定（GB、SN标准）用途：用于落总数的测定成分(g/L)胰蛋白胨 5.0酵母浸粉 2.5葡萄糖 1.0琼脂 15.0pH值7.0 ± 0.2 25℃

GN增液颗粒 英文名称：Gram Negative Enrichment Broth 产品规格：250g 产品用途：用于志贺氏的增培养，亦可用于沙门氏增培养用途:用于志贺氏的增培养，亦可用于沙门氏增培养。成分(g/L)胰蛋白胨 20.0葡萄糖 1.0磷酸二氢钾 1.5磷酸氢二钾 4.0甘露醇 2.0枸橼酸钠 5.0去氧胆酸钠 0.5氯钠 5.0pH值7.0 ± 0.1 25℃使用方法取一袋培养基,加入 300ml 蒸馏水中,加热搅拌溶解,121℃高压灭 15 分钟,备用。

氯化钠蛋白胨缓冲液颗粒 英文名称：Buffered Sodium Chloride Peptone Solution 产品规格：250g 产品用途：用于样品制备的营养液用途:用于样品制备的营养液。成分(g/L)蛋白胨 1.0磷酸氢二钠 7.23磷酸二氢钾 3.56氯钠 4.3pH值7.0 25℃用法称取本品 16.1g,加热溶解于 1000ml 纯化水中,分装三角瓶,121℃高压灭 15分钟,备用。

MLCB寒天培地颗粒 英文名称：MLCB Agar 产品规格：250g 产品用途：用于沙门氏分离培养用途 : 用于沙门氏分离培养。成分(g/L)酵母浸粉 5.0蛋白胨 10.0牛心浸粉 2.0氯钠 4.0甘露醇 3.0L-赖氨酸盐酸盐 5.0硫代硫酸钠 4.0柠檬酸铁铵 1.0煌绿 0.0125结晶紫 0.01琼脂 15.0pH值 6.8 ± 0.2 25℃用法称取本品 49.0g,加热煮沸溶解于 1000ml 蒸馏水中,冷至 50-55℃时,倾入无平皿,备用。

胰酪大豆胨液体培养基 (TSB)（颗粒） 英文名称： 产品规格：250g 产品用途：一种通用的营养培养基用途:一种通用的营养培养基 ，用于各种微生物的增培养。成分(g/L)胰酪胨 17.0大豆木瓜蛋白酶水解物 3.0氯钠 5.0磷酸氢二钾 2.5葡萄糖 2.5pH值7.3 ± 0.2 25℃用法称取本品 30.0g,加热搅拌溶解于 1000ml 纯化水中,分装于试管或其他合适的容器中,121℃高压灭 15 分钟,备用。规格:250g有效期: 三年

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