本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
参数规格：
产品名称：汉滩病毒PCR检测试剂盒
产品规格：50T
产品货号：FS-P63610
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
产品特点：本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。
运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限一年。
自备试剂
DNA模板、10×ROX（根据机型决定，具体见使用方法）。
产品及特点：
1. 即开即用，用户只需要提供病毒样品。
2. 根据保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量PCR检测，避免后续污染。
5. 本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
使用方法：
一、稀释PCR阳性对照（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）
1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
2. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
8. 如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号（浓度为1×10E4 拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝）或第5号（浓度为1×10E5 拷贝/μL，10μL相当于10万拷贝）再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品，则PC和NC的体积也必须是200μL。
9. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。
三、设置qPCR反应（20 μL体系，在样品制备室进行）
10. 如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复，则反应设置数量相应增加2或3倍。
11. 产品仅用于科研在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后加）
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
NAD;氧化型辅酶I;β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸水合物 β-Nicotinamide adenine dinucleotide hydrate(β-NAD) 53-84-9 质量规格：>98%,BR
蛋白酶3底物1m，荧光 Caspase 3 Substrate 1m(Apopain), fluorogenic; Ac-DEVD-AMC 169322-61-0 质量规格：>95%,BR
细胞SGK1激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C） 进口/国产 规格：20次
N-乙酰-DL-亮氨酸 N-Acetyl-DL-leucine 99-15-0 质量规格：0.98
五味子酚（标准品） schisanhenol 69363-14-0 质量规格：HPLC≥98%，标准品
组织白细胞介素-1β转换酶（ICE）活性荧光淬灭法定量检测试剂盒 进口/国产 规格：20次
胆碱酯酶（CHE）定量检测试剂盒 进口/国产 规格：50次
利福霉素钠；利福霉素SV钠 Rifamycin sodium salt 14897-39-3 质量规格：>900IU/mg ,BR
6-O-去甲多奈哌齐 6-O-Desmethyl Donepezil 120013-56-1 质量规格：美国进口
真/酵母蛋白巯基/结合巯基含量比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格：20次
冰冻切片细胞色素C氧化酶活性染色试剂盒 进口/国产 规格：50次
十八烷醇,1-十八醇(标准品) 1-Octadecanol 112-92-5 质量规格：>98%,标准品
动物组织冰冻切片糖蛋白高希尔（PAS）法阿尔新蓝（ALCIAN BLUE）染色试剂盒 进口/国产 规格：50次
乳果糖（标准品） Lactulose 4618-18-2 质量规格：含量测定
细胞色素P450亚酶CYP3A1（BROD）活性荧光定量检测试剂�� 进口/国产 规格：20次
4-磺酰杯[4]芳烃水合物(>94.0%(T)) 4-Sulfocalix[4]arene Hydrate 112269-92-8 质量规格：>94.0%(T)
汉滩病毒PCR检测试剂盒EEM培养基 英文名称：EEM medium 产品规格：250g 产品用途：用于致病性大肠杆的增培养和肠杆的增培养产品用法： 称取本品 43.5g ,溶解于 1000ml蒸馏水中,分装试管,经 100℃流动蒸汽灭 30 分钟,备用。无需高压灭。产品用途：用于致病性大肠杆的增培养和肠杆的增培养
胰蛋白胨胆盐琼脂 英文名称：Tryptone Bile Agar 产品规格：250g 产品用途：用于大肠杆的膜过滤法选择性培养(ISO标准)用途:滤膜法快速检测水中大肠杆和大肠群用法称取本品 36.5g,加热溶解于 1000ml 蒸馏水中,分装,121℃高压灭 15 分钟,备用
Elek氏培养基 英文名称：Elek Medium 产品规格：250g 产品用途：用于致泻大肠埃希氏的产毒培养用途:用于致泻大肠埃希氏的测定。成分(g/L)蛋白胨 20.0麦芽糖 3.0乳糖 0.7氯钠 5.0琼脂 14.0pH值7.8 ± 0.1 25℃用法称取本品 43.7g,加入 1000ml蒸馏水中,121℃高压灭 15分钟,备用。
大肠群快检纸片(水源水) 英文名称：Coliform bacteria detective plate 产品规格：5份/包 产品用途：用于水质检验主要用于水质检验，方便、快捷、迅速！在2-8℃冰箱保存，铝箔袋打开后，未用的测试纸片要放回袋中重新封好，放到冰箱中，一个月内用完。
MFC肉汤 英文名称：MFC Broth 产品规格：250g 产品用途：用于大肠群的滤膜法检测MFC肉汤是公司改良的培养基，用于大肠群的滤膜法检测。
MFC琼脂 英文名称：MFC Agar 产品规格：250g 产品用途：用于大肠群的滤膜法检测用途用于生活饮用水及其水源水中粪大肠群测定。成分（g/L）多价蛋白胨 5.0g胰蛋白胨 10.0g乳糖 12.5g酵母粉 3.0g三号胆盐 1.5g氯钠 5.0g蓝 0.1g琼脂 15.0gPH值 7.4±0.2用 法称取本品52.3克，加热煮沸溶解于1000ml蒸馏水中,冷却至45-50℃时，倾入无平皿。无需高压灭。
煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB） 英文名称：Brilliant Green Lactose Bile Broth 产品规格：250g 产品用途：用于大肠群、大肠杆的测定(GB、SN标准)用途:用于大肠群的确证试验。成分(g/L)蛋白胨 10.0乳糖 10.0牛胆粉 20.0煌绿 0.0133pH值 7.2±0.1 25℃用法称取本品40.0g,加热搅拌溶解于 1000ml 蒸馏水中,分装到有倒立发酵管的20mm*150mm 试管中,每管 10ml,121℃高压灭 15 分钟,备用。
Voges-Proskauer(V-P)试剂 英文名称：V-P Box 产品规格：5ml*4 产品用途：用于V-P试验V-P试剂是Voges-Proskauer试剂的简称，用于V-P试验。1、成分甲液α-萘酚 5.0g无水乙醇 100.0ml乙液氢钾 40.0g用蒸馏水加至1000ml2、试验方法将3%氯钠胰蛋白胨大豆琼脂生长物接种3%氯钠MR-VP培养基，36℃士1℃培养48h。取1ml培养物转放到一个试管内，加0.6ml甲液，摇动。加0.2ml乙液，摇动。随意加一点肌酸结晶，4h后观察结果。阳性结果是呈伊红的粉红色。
pH7.3PBS缓冲液 英文名称：PBS 产品规格：250g 产品用途：PBS是Tris-HCl缓冲盐溶液PBS是Tris-HCl缓冲盐溶液，为等渗盐溶液加Tris-HCl缓冲液
MEE肉汤 英文名称：MEE Broth 产品规格：250g 产品用途：用于肠道的选择性增培养(SN标准)用途:用于肠杆选择性增培养。成分(g/L)蛋白胨 10.0葡萄糖 5.0磷酸氢二钠 6.45磷酸二氢钾 2.0三号胆盐 10.0煌绿 0.015pH值7.2 ± 0.2 25℃用法称取本品 33.5g,加热搅拌溶解于 1000ml 蒸馏水中,于沸水中加热 30 分钟,迅速冷却培养基分装于17mm × 170mm 试管中,每管 10ml ,无需高压灭,0 - 5℃可存放一周。
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