实验注意事项:
1)RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、等很多材料,不同的样本有不同要求,实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况;
2)客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号;
3)客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4)样本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类,探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加,非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量(包括定量和相对定量)和定性分析。
主要服务:DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术:引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
产品及特点:
1. 即开即用,用户只需要提供病毒样品。
2. 根据保守序列设计的专一性引物,与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量PCR检测,避免后续污染。
5. 本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。
本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
参数规格:
产品名称:麻疹病毒PCR检测试剂盒
产品规格:50T
产品货号:FS-P63630
产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
产品特点:本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。
运输及保存
低温运输,-20℃保存,保存期限一年。
自备试剂
DNA模板、10×ROX(根据机型决定,具体见使用方法)。
![](https://yt.yzimgs.com/ComFolder/200132342/image/202107/202107061415319781.jpg)
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
使用方法:
一、稀释PCR阳性对照(以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)
1. 注意:由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
2. 标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。
3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中,充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
8. 如果有N个样品,必须设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号(浓度为1×10E4 拷贝/μL,10μL相当于1万拷贝)或第5号(浓度为1×10E5 拷贝/μL,10μL相当于10万拷贝)再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品,则PC和NC的体积也必须是200μL。
9. 用自选方法纯化样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。
三、设置qPCR反应(20 μL体系,在样品制备室进行)
10. 如果只做1次重复,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复,则反应设置数量相应增加2或3倍。
11. 产品仅用于科研在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后加)
细β-半乳糖苷酶活性比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
环黄芪醇 Cycloastragenol 84605-18-5 质量规格:HPLC≥98%,标准品
泰诺福韦磷酸盐 Tenofovir Phosphate 206646-04-0 质量规格:美国进口
去[5-(2-二甲氨基)乙基]地尔硫卓 Des[5-(2-dimethylamino)ethyl] Diltiazem 87447-47-0 质量规格:美国进口
肉类乙酸比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
脂蛋白脂酶活性比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
唑来磷酸(标准品) Zoledronic acid hydrate 165800-06-6 质量规格:HPLC>98%,标准品
丹酚酸D(标准品) Salvianolic acid D 142998-47-8 质量规格:HPLC≥98%,标准品
大米蛋白化学萃取试剂盒 进口/国产 规格:20次(10克/次)
水质汞元素比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
苯磺酸氨氯地平(络活喜、安洛地) Amlodipine Besylate 111470-99-6 质量规格:>99%,EP 6.4,BR
头孢哌酮;头孢哌酮酸 Cefoperazone Acid 62893-19-0 质量规格:>98%,BR
纯化线粒体膜通道孔(MPTP)比色法检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
二硫代乙酰胺(>98%,BR) Dithiooxamide 79-40-3 质量规格:>98%,BR
动物细胞N-乙酰转移酶1(NAT1)活性比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
L-精氨酸-α-酮戊二酸盐(2:1) L-Arginine AKG 2:1 5256-76-8 质量规格:>98%,BR
麻疹病毒PCR检测试剂盒脑心浸液琼脂(BHIA) 英文名称:Brain Heart infusion Agar 产品规格:250g 产品用途:用于营养苛求细的增培养用途:营养丰富,用于培养各种细。成分(g/L)牛脑浸粉 4.0牛心浸粉 4.0蛋白胨 5.0酪蛋白胨 16.0氯钠 5.0葡萄糖 2.0磷酸氢二钠 2.5琼脂 13.5pH值7.4 ± 0.2 25℃用法称取本品 52.0g,加热搅拌溶解于 1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭 15 分钟,备用。
Pfizer肠球选择性琼脂(PSE琼脂) 英文名称:Pfizer Enterococcus Selective Agar 产品规格:250g 产品用途:用于粪链球的选择性分离(SN标准)用途用于食品中粪链球选择性分离培养。成分(g/L)蛋白胨 20.0g酵母浸粉 5.0g牛胆汁物 10.0g氯钠 5.0g柠檬酸钠 1.0g柠檬酸铁铵 0.5g 0.25g七叶苷 1.0g琼脂 15.0gpH值 7.1±0.2用 法称取本品57.75克,加热溶解于1000ml蒸馏水中,分装, 121℃高压灭15分钟,备用。
6.5%NaCl葡萄糖琼脂 英文名称:6.5% NaCl Dextrose Agar 产品规格:250g 产品用途:用于肠球高盐耐受生长试验用途:用于肠球高盐耐受生长试验。成分(g/L)蛋白胨 10.0牛肉浸粉 3.0葡萄糖 1.0氯钠 65.0溴紫 0.015琼脂 13.0pH值7.4±0.1 25℃用法称取本品 92.0g,加热溶解于 1000ml 蒸馏水中,分装,121℃高压灭 15 分钟,备用。
哥伦比亚血琼脂基础(改良) 英文名称: 产品规格:250g 产品用途:用于链球等苛求培养产品用途:营养非常丰富,用于链球等苛求培养(加入5-10%脱纤维羊血)产品用法:称取本品 39g,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,分装三角瓶 121℃高压灭 15 分钟,冷至 50℃左右时,加入 5%无脱纤维羊血,混匀,倾入无平皿。贮存方法:放置阴凉干燥处保存
乙基紫叠氮钠肉汤(litsky肉汤) 英文名称: 产品规格:250g 产品用途:用于链球增培养产品用途:用于链球增培养。产品用法:称取本品35.7g,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,分装16mm*160mm试管,每管10ml,121℃高压灭15min,备用。
叠氮葡萄糖肉汤 英文名称: 产品规格:250g 产品用途:用于链球增培养产品用途:用于链球增培养。产品用法:称取本品35.6g,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,分装16mm*160mm试管,每管10ml,121℃高压灭15min,备用。注:制备双料培养基时,称取本品71.2g,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,分装18mm*180mm试管,每管10ml,121℃高压灭15min,备用。
MC培养基(不含琼脂) 英文名称: 产品规格:250g 产品用途:用于嗜热链球增培养称取本品61.0g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,分装,121℃高压灭15min,备用
- 温馨提示:为规避购买风险,建议您在购买前务必确认供应商资质与产品质量。
- 免责申明:以上内容为注册会员自行发布,若信息的真实性、合法性存在争议,平台将会监督协助处理,欢迎举报