实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
产品及特点：
1. 即开即用，用户只需要提供病毒样品。
2. 根据保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量PCR检测，避免后续污染。
5. 本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。
本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
参数规格：
产品名称：普氏立克次体PCR检测试剂盒
产品规格：50T
产品货号：FS-P63660
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
产品特点：本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。
运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限一年。
自备试剂
DNA模板、10×ROX（根据机型决定，具体见使用方法）。
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
使用方法：
一、稀释PCR阳性对照（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）
1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
2. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
8. 如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号（浓度为1×10E4 拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝）或第5号（浓度为1×10E5 拷贝/μL，10μL相当于10万拷贝）再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品，则PC和NC的体积也必须是200μL。
9. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。
三、设置qPCR反应（20 μL体系，在样品制备室进行）
10. 如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复，则反应设置数量相应增加2或3倍。
11. 产品仅用于科研在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后加）
3-乙基-d5-腺嘌呤 3-Ethyl-d5-adenine 147028-85-1 质量规格：美国进口
BrdU标记法细胞繁殖流式细胞仪检测试剂盒 进口/国产 规格：10/20次
酵母镁离子浓度化学比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格：20次
泽泻醇B醋酸酯(标准品) Alisol B 23-acetate 26575-95-1 质量规格：HPLC≥98%，标准品
1,3-二氨基芘 1,3-Diaminopyrene 92821-64-2 质量规格：
偶氮氯膦I Chlorophosphonazo Ⅰ 85561-96-2 质量规格：AR,显色剂
N-亚硝基-N-甲基尿烷(>95.0%(GC)) N-Methyl-N-nitrosourethane 615-53-2 质量规格：>95.0%(GC)
冰冻切片半胱氨酸蛋白酶-3（CASPASE-3）活性原位荧光染色检测试剂盒 进口/国产 规格：50次
曲洛司坦/ 亚硝酸盐环氧雄烷 Trilostane 13647-35-3 质量规格：>99.0%,BR
L-苏氨酸甲酯盐酸盐 L-Threonine methyl ester hydrochloride 39994-75-7 质量规格：0.98
真/酵母细胞线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒 进口/国产 规格：20次
4-(N,N-二苯氨基)苯甲醛(>98.0%(GC)(N)) 4-(N,N-Diphenylamino)benzaldehyde 833249 质量规格：>98.0%(GC)(N)
重组腺病毒PCR鉴定试剂盒 进口/国产 规格：20次
细胞P27蛋白表达流式细胞仪检测试剂盒 进口/国产 规格：10/20次
对硝基苄醇(>98%,BR) 4-Nitrobenzyl alcohol 619-73-8 质量规格：>98%,BR
组织乙酰辅酶A羧化酶（ACETYL-COA CARBOXYLASE）活性比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格：20次
普氏立克次体PCR检测试剂盒营养盐琼脂 英文名称：Nutrient agar 产品规格：250g 产品用途：用于纺织中检验材料耐真、霉的效能用途:用于检测合成聚合材料的抗真活性用法称取本品 18.1g,加热溶解于 1000ml 蒸馏水中,分装,121℃高压灭 15 分钟,备用。
马铃薯葡萄糖琼脂（含氯霉素） 英文名称：Potato Dextrose Agar（Chloramphenicol） 产品规格：250 产品用途：用于霉和酵母的计数和分离培养。用途:用于霉和酵母的计数和分离培养。成分(g/L)马铃薯粉 6.0葡萄糖 20.0氯霉素 0.1琼脂 20.0用法称取本品 46.1g,加入 1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭 20分钟,备用。灭好的培养基仅可重复加热熔化一次。
BIGGY琼脂 英文名称：BIGGY Agar 产品规格：250g 产品用途：用于念珠的分离培养和计数用途:用于念珠的分离培养。用法称取本品 45.0g,加热搅拌溶解于 1000ml 蒸馏水中,煮沸不要超过 1 分钟,冷至45-50℃时,倾入无平皿,备用。无需高压灭。
1%吐温80-玉米琼脂培养基 英文名称：1%Tween80-Corn Meat Agar Mediun 产品规格：250g 产品用途：用于白色念珠产芽管试验。用途:用于鉴定白色念球和霉(产芽管试验)。成分(g/L)玉米浸粉 7.0琼脂 15.0用法称取本品 22.0g,另取吐温 80 10g,混匀,加热溶解于 1000ml蒸馏水中,分装,121℃高压灭 15 分钟,备用。
SDAY培养基 英文名称：SDAY Medium 产品规格：250g 产品用途：用于真的分离培养用途:用于真的分离培养。用法称取本品 80.0g,加热溶解于 1000ml 蒸馏水中,分装,121℃高压灭 15 分钟,备用。
麦芽浸膏琼脂 英文名称：Malt Extract Agar 产品规格：200g 产品用途：用于霉和酵母的分离培养和计数用途:用于真计数(特别是酵母和霉的计数)和微生物维生素验证时测试种的培养。成分(g/L)麦芽浸粉 30.0大豆蛋白胨 3.0琼脂 15.0pH值5.6 ± 0.2 25℃用法称取本品 48.0g,加热搅拌溶解于 1000ml 蒸馏水中, 121℃高压灭 10 分钟, 备用。注:高压灭后有沉淀物。
皮肤癣鉴别琼脂（DTM） 英文名称：DTM Agar 产品规格：250g 产品用途：用于皮肤癣鉴别培养用途:用于皮癣的分离培养。成分(g/L)大豆蛋白胨 10.0葡萄糖 10.0红 0.2氯霉素 0.1琼脂 20.0pH值5.5 ± 0.2 25℃用法称取本品40.3g ,加热溶解于1000ml 蒸馏水中，分装，每瓶200ml，121℃高压灭 15分钟，冷至 50℃左右时，加入1支 DTM添加剂 1(含 0.1g)和1支 DTM 添加剂 2(含硫酸庆大霉素 0.02g)， 混匀，倾入无平皿 或试管，备用。
马铃薯-蔗糖培养基 英文名称：Potato sucrose Medium 产品规格：250g 产品用途：用于霉增培养用途:用于霉增培养。注：此培养基含琼脂用法称取本品 47.0g,加热溶解于 1000ml 蒸馏水中,分装,121℃高压灭 15 分钟,备用。
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