实验注意事项:
1)RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、等很多材料,不同的样本有不同要求,实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况;
2)客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号;
3)客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4)样本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类,探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加,非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量(包括定量和相对定量)和定性分析。
主要服务:DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术:引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
产品及特点:
1. 即开即用,用户只需要提供病毒样品。
2. 根据保守序列设计的专一性引物,与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量PCR检测,避免后续污染。
5. 本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。
本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
参数规格:
产品名称:人类**缺陷病毒1型(HIV-1)PCR检测试剂盒
产品规格:50T
产品货号:FS-P63718
产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
产品特点:本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。
运输及保存
低温运输,-20℃保存,保存期限一年。
自备试剂
DNA模板、10×ROX(根据机型决定,具体见使用方法)。
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
使用方法:
一、稀释PCR阳性对照(以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)
1. 注意:由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
2. 标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。
3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中,充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
8. 如果有N个样品,必须设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号(浓度为1×10E4 拷贝/μL,10μL相当于1万拷贝)或第5号(浓度为1×10E5 拷贝/μL,10μL相当于10万拷贝)再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品,则PC和NC的体积也必须是200μL。
9. 用自选方法纯化样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。
三、设置qPCR反应(20 μL体系,在样品制备室进行)
10. 如果只做1次重复,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复,则反应设置数量相应增加2或3倍。
11. 产品仅用于科研在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后加)
细胞黄嘌呤氧化酶活性比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
人体NK细胞分离试剂盒 进口/国产 规格:10次
没食子儿茶素没食子酸酯(标准品) GCG;(−)-Gallocatechin gallate 4233-96-9 质量规格:HPLC≥98%,标准品
人体组织N-乙酰转移酶2(NAT2)活性荧光定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
脱氢诺龙醋酸酯 Dehydronandrolon 2590-41-2 质量规格:>96%
阿立哌唑-d8 Aripiprazole-d8 1089115-06-9 质量规格:美国进口
茯苓酸(标准品) Pachymic acid 29070-92-6 质量规格:HPLC≥98%,标准品
外消旋顺式盐酸舍曲林 rac-cis-Sertraline Hydrochloride 79617-95-1 质量规格:美国进口
粪便伤寒沙门氏(Salmonella Typhi)定性基因检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
荧光生物素稳定/稀释溶液 进口/国产 规格:10毫升
植物基因组DNA纯化试剂盒(低多糖/酚) 进口/国产 规格:50次
细胞PDGF-B蛋白表达比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:10/50 次
土贝母苷甲(标准品) Tubeimoside I 102040-03-9 质量规格:HPLC≥98%,标准品
鼠尾草酚(标准品) Carnosol 5957-80-2 质量规格:HPLC≥95%,标准品
Zinc固着液 进口/国产 规格:50毫升
二氢-D-赤-鞘氨醇 Dihydro-D-erythro-Sphingosine 764-22-7 质量规格:美国进口
人类**缺陷病毒1型(HIV-1)PCR检测试剂盒检定培养基1号(低PH) 英文名称:Antibiotic Agar No.1 产品规格:250g 产品用途:用于磺苄青霉素效价测定用途:用于磺苄青霉素效价测定。成分(g/L)蛋白胨 5.0牛肉浸粉 3.0磷酸氢二钾 3.0琼脂 15.0pH值6.5- 6.6 25℃用法称取本品 26.0g,加热搅拌溶解于 1000ml 蒸馏水中,116℃高压灭 20 分钟,备用。
检定培养基4号(PH6.5-6.6) 英文名称:Antibiotic Agar No.4 产品规格:250g 产品用途:用于盐霉素钠、莫能素及其制剂等效价测定用途:用于盐霉素钠、莫能素及其制剂等效价测定。成分(g/L)蛋白胨 3.0葡萄糖 1.0琼脂 20.0酵母浸出物 3.0pH值6.5-6.6 25℃用法称取本品27.0g,加热溶解于 1000ml 纯化水中,121℃高压灭 15 分钟,备用。
检定培养基6号(7.8-8.0) 英文名称:Antibiotic Agar No.6 产品规格:250g 产品用途:用于粘素等的效价测定用途:用于粘素等的效价测定。成分(g/L)蛋白胨 8.0酵母粉 5.0牛肉粉 3.0氯钠 45.0磷酸氢二钾 3.3磷酸二氢钾 1.0葡萄糖 2.5琼脂 13.0pH值7.8 - 8.0 25℃用法称取本品80.8g,加热溶解于1000ml 纯化水中,115℃高压灭30分钟,备用。
0.5%葡萄糖肉汤琼脂 英文名称: 产品规格:250g 产品用途:用于硫酸链霉素等的无检查称取本品38.0g,加热溶解于1000ml蒸馏水,分装,115~116℃高压灭30min,备用。
HB四连式牛津杯 英文名称: 产品规格:10个*15包/箱 产品用途:应用于药敏试验【产品名称】通用名称:HB四连式牛津杯。【包装规格】10个/包,分别装在一次性无平皿中。【预期用途】应用于药敏试验。【检验原理】将HB四连式牛津杯放置于已制备好的平板上,加上抑剂,培养后观察抑圈直径。【主要组成成份】塑料支架固定的四个塑料杯。【储存条件及有效期】储存条件:室温保存;有效期:密封保存3年。【适用仪器】适用实验室配套仪器。【样本要求】样本的收集、储存、处理、运输应密封完好,避免污染。【检验及使用方法】1、制备底层培养基:取直径为90mm平皿,注入约15mL-20mL加热融化的培养基(其中塑料平皿加入15mL,玻璃平皿加入20mL),使其在平皿底部均匀摊布,放置在水平台面上使其凝固,作为底层;2、制备层 :另取适量培养基加热融化后,放冷至48-50℃(芽孢可至60℃),加入适量的悬液(能得到清晰的抑圈为度),摇匀,用移液器(枪头灭)吸取5 mL上述培养基快速注入平皿中央,按同一方向轻轻摇动平皿使其在底层上均匀摊布,作为层(注意事项:层培养基表面一定要平整,否则会导致漏液)放置在水平台上冷却;3、放置HB四连式牛津杯 :用无镊子夹住HB四连式牛津杯正面的凸点(中央有凸点且平衡翼上标有“生物”字体的为产品正面),将其放置在层培养基表面上,将压杯板盖上,压住牛津杯5秒左右,使4个小杯与培养基表面紧密接触,防止出现缝隙导致漏液,然后小心拿走压杯板(压杯板已经辐照灭,可以直接使用;多次使用,可用酒精棉擦拭即可);4、加入,进行培养 :向小杯中加入,将平皿平稳转移至培养箱培养(转移过程中轻拿轻放,避免剧烈震动) 。
培养基C(EP标准) 英文名称: 产品规格:250g 产品用途:用于效价测定称取本品20.0g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,分装,121℃高压灭15min,备用。
培养基B(EP标准) 英文名称: 产品规格:250g 产品用途:用于效价测定称取本品45.0g,另取吐温80 10.0g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,分装,121℃高压灭15min,备用。
培养基1(USP) 英文名称: 产品规格:250g 产品用途:用于微生物方法测定效价称取本品25.5g,加热溶解于1000ml纯化水中,分装,121℃高压灭15min,备用。
培养基2(USP) 英文名称:Medium 2 产品规格:250g 产品用途:用于微生物方法测定效价称取本品25.5g,加热溶解于1000ml纯化水中,分装,121℃高压灭15min,备用。
检定培养基 8 号 英文名称: 产品规格:250g 产品用途:用于万古霉素效价测定的层培养基用途:用于万古霉素效价测定的层培养基。成分(g/L)Peptone/蛋白胨 6.0Yeast Extract/酵母浸粉 3.0Beef Extract/牛肉浸粉 1.5Agar/ 琼脂 15.0pH值5.9 ± 0.1 25℃用法:称取本品 25.5g,加热溶解于 1000ml 纯化水中,分装,121℃高压灭 15分钟,备用。规格:250g有效期: 三年
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