实验注意事项:
1)RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、等很多材料,不同的样本有不同要求,实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况;
2)客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号;
3)客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4)样本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类,探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加,非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量(包括定量和相对定量)和定性分析。
主要服务:DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术:引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
产品及特点:
1. 即开即用,用户只需要提供病毒样品。
2. 根据保守序列设计的专一性引物,与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量PCR检测,避免后续污染。
5. 本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。
本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
参数规格:
产品名称:单纯疱疹病毒1型PCR检测试剂盒
产品规格:50T
产品货号:FS-P63736
产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
产品特点:本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。
运输及保存
低温运输,-20℃保存,保存期限一年。
自备试剂
DNA模板、10×ROX(根据机型决定,具体见使用方法)。
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
使用方法:
一、稀释PCR阳性对照(以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)
1. 注意:由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
2. 标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。
3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中,充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
8. 如果有N个样品,必须设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号(浓度为1×10E4 拷贝/μL,10μL相当于1万拷贝)或第5号(浓度为1×10E5 拷贝/μL,10μL相当于10万拷贝)再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品,则PC和NC的体积也必须是200μL。
9. 用自选方法纯化样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。
三、设置qPCR反应(20 μL体系,在样品制备室进行)
10. 如果只做1次重复,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复,则反应设置数量相应增加2或3倍。
11. 产品仅用于科研在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后加)
通用型鸡传染性贫血(Chicken Anemia Virus;CAV)基因检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
奥比沙星(标准品) Orbifloxacin 113617-63-3 质量规格:含量测定
通用型蛋白电泳考马斯亮蓝染色试剂盒 进口/国产 规格:10次
鱼肝油维生素A含量比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
细胞半胱氨酸蛋白酶-8(CASPASE-8)活性荧光定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
醋酸艾塞那肽 Exenatide Acetate/Exendin-4 141732-76-5 质量规格:纯度98%以上
吡非尼酮,哌非尼酮 Pirfenidone 53179-13-8 质量规格:>98.5%,BR,可用于细胞培养
冰冻切片碱性磷酸酶活性染色试剂盒 进口/国产 规格:50次
真/酵母黑色素含量比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
细胞ITK激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C) 进口/国产 规格:20次
四氢生物蝶呤;沙丙蝶呤;(6R)-BH4 Tetrahydro-L-Biopterin (dihydrochloride) 69056-38-8 质量规格:>99%
糖果糖精(saccharin)含量高效液相色谱法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
白屈菜红碱(标准品) Chelerythrine 3895-92-9 质量规格:HPLC≥98%,标准品
5-硝基吲哚(>98.0%(GC)) 5-Nitroindole 6146-52-7 质量规格:>98.0%(GC)
乙基氢化铜蛋白,盐酸奥普托欣 Ethylhydrocupreine HCl,Optochin HCl 3413-58-9 质量规格:>97%,美国进口
甲砜霉素甘氨酸酯盐酸盐 Thiamphenicol glycinate HCl 2611-61-2 质量规格:>98%,BR
单纯疱疹病毒1型PCR检测试剂盒乳酸酚棉蓝染色液 英文名称: 产品规格:5ml*8 产品用途:用于真染色乳酸酚棉蓝染色液说明书[规格]:5ml*8[组成]: 10g, 乳酸10ml,甘油 20ml,棉蓝(cottonblue) 0.02g,蒸馏水 10ml。[使用方法]:于洁净载玻片上,滴1-2滴乳酸酚棉蓝染色液,用解剖针从霉落的边缘外取少量带有孢子的丝置于染色液中,再细心地将丝挑散开,然后小心地盖上盖玻片(加热或不加热),注意不要产生气泡。置显微镜下先用低倍镜观察,必要时再换高倍镜。[结果]:酵母细胞、丝体和产孢结构等皆可被染成亮蓝色;背景为暗淡的蓝色。
革兰氏染色液试剂盒 英文名称:Gram Staining Kit 产品规格:5ml*8 产品用途:用于细革兰氏染色产品用途:用于细革兰氏染色产品用法1.涂片经火焰固定,加(结晶紫溶液)溶液A染1分钟,用清水冲去染液。2.加(碘液)溶液B染1分钟,水洗。3.加(脱色液)溶液C,不时摇动玻片约10-30秒,至无紫色脱落为止,水洗。4.加溶液D,染1分钟,水洗。5.干后油镜镜检。阳性呈紫色、阴性呈淡红色
Andrade指示剂 英文名称: 产品规格:100ml 产品用途:0.5g酸性复红溶解于100ml蒸馏水中。加1N NaOH荣誉16ml,于室温放置24h,弱褪色不够,可再加1-2ml1N NaOH溶液,使呈微黄色。可保存数年
假单胞CFC选择性培养基添加剂(冻干) 英文名称: 产品规格:1ml*5 产品用途:每支添加于200ml假单胞CFC选择性培养基中用途:每支添加于200ml假单胞CFC选择性培养基中用法:加1ml无蒸馏水复溶后使用规格:1ml*5有效期:一年 保存:2-8℃
OADC添加剂 英文名称: 产品规格:10ml*10支 产品用途:用于添加于Middle Brrok 7H11琼脂用于添加于Middle Brrok 7H11琼脂
Preston肉汤添加剂 英文名称: 产品规格:1ml*5 产品用途:HB8725添加剂,每200ml加一支。HB8725添加剂,每200ml加一支。
营养肉汤(NB) 英文名称:Nutrient Broth 产品规格:250g 产品用途:一般细培养,转种,复壮,增等.也可用于效果测定用途:用于一般细培养、转种、复壮、增等。成分(g/L)蛋白胨 10.0牛肉浸粉 3.0氯钠 5.0pH值7.2 ± 0.2 25℃用法称取本品 18.0g,加热溶解于 1000ml 蒸馏水中,分装三角瓶或试管,121℃高压灭 15 分钟备用。
醇类中和剂管 英文名称: 产品规格:9ml*20 产品用途:主要用于含有醇类剂样品的增培养【用途】主要用于含有醇类**剂样品的增培养。【检验原理】蛋白胨提供氮源、维生素和生长因子;氯钠维持均衡的渗透压。【主要组成成份】蛋白胨、牛肉粉、氯钠等。【样本要求】样本的收集、储存、处理、运输应严格执行无操作,避免污染,【参考值(参考范围)】本品的空白对照应无生长。【检验结果的解释】培养物有微生物生长,应根据落特征判定,如落特征不明显,应通过生化试验确认。【检验方法的局限性】本产品仅用于微生物的基础培养,不能用于微生物的定性试验。【注意事项】本品仅用于体外诊断。
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