后才能进行后续的实验。
培养步骤：
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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产品名称
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规格
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货号
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DMEM/F12（无糖）基础培养基
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500ml
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FS-X019994
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产品名称：DMEM/F12（无糖）基础培养基
英文名称：DMEM/F12（无糖）
货号：BH-X019994
产品规格：500ml
细胞培养操作规程：
主要功能：
（1）血管平滑肌细胞的再生能力是原发血管病变的重要因素。
（2）表达钙通道及ICAM-1和VCAM-1，参与血管壁的炎症反应。
（3）与血管的进展和稳定有关。
生理变化：
（1）主动脉硬化。
（2）主动脉瘤
（3）主动脉钙化。
基本特性：
（1）组织来源于正常大鼠大动脉组织。
（2）鉴定：肌动蛋白，alpha-SMA和Desmin荧光染色。
（3）原代细胞培养末期液氮冻存。
（4）每冻存管细胞数：>5×105 cells/1ml。
（5）肌动蛋白，alpha-SMA和Desmin荧光染色验证。
（6）不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、酵母。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
操作要点：
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内完全解冻，使细胞能尽快通过*易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
哥伦比亚血琼脂基础 250(g)
BAIRD-PARKER 贝尔德-帕克琼脂/葡萄状球选择培养基
DEV ENDO agar DEV ENDO琼脂 1.10684.0500MERCK默克
LB broth acc.to Lennox LB肉汤 1.00547.0500MERCK默克
李斯特氏琼脂（基础）
Test test PH8.0for the inhibitor test测试琼脂PH8.0（抑制剂测试） 1.10664.0500MERCK默克
假单胞琼脂F
DMEM/F12（无糖）基础培养基促肾上皮质释放(CRH)elisa检测试剂盒英文名称：CRH ELISA Kit，英文缩写：CRH，产品别名：促肾上皮质释放(CRH)ELISA检测试剂盒，促肾上皮质释放(CRH)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。
丙酰辅酶A羧化酶β多肽(PCCB)elisa检测试剂盒英文名称：PCCB ELISA Kit，英文缩写：PCCB，产品别名：丙酰辅酶A羧化酶β多肽(PCCB)ELISA检测试剂盒，丙酰辅酶A羧化酶β多肽(PCCB)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。
超磷酸化微管相关蛋白tau(hyper phosphorylated MAPT)elisa检测试剂盒英文名称：hyper phosphorylated MAPT ELISA Kit，英文缩写：hyper phosphorylated MAPT，产品别名：超磷酸化微管相关蛋白tau(hyper phosphorylated MAPT)ELISA检测试剂盒，超磷酸化微管相关蛋白tau(hyper phosphorylated MAPT)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。
板层素相关多肽2亚型α(TMPO)elisa检测试剂盒英文名称：TMPO ELISA Kit，英文缩写：TMPO，产品别名：板层素相关多肽2亚型α(TMPO)ELISA检测试剂盒，板层素相关多肽2亚型α(TMPO)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。
白介素26(IL-26)elisa检测试剂盒英文名称：IL-26 ELISA Kit，英文缩写：IL-26，产品别名：白介素26(IL-26)ELISA检测试剂盒，白介素26(IL-26)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。
癌症促凝素(CP)elisa检测试剂盒英文名称：CP ELISA Kit，英文缩写：CP，产品别名：癌症促凝素(CP)ELISA检测试剂盒，癌症促凝素(CP)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。
β-连环蛋白(CTNNB1/CTNNB/OK/SW-cl.35/PRO2286)elisa检测试剂盒英文名称：CTNNB1/CTNNB/OK/SW-cl.35/PRO2286 ELISA Kit，英文缩写：CTNNB1/CTNNB/OK/SW-cl.35/PRO2286，产品别名：β-连环蛋白(CTNNB1/CTNNB/OK/SW-cl.35/PRO2286)ELISA检测试剂盒，β-连环蛋白(CTNNB1/CTNNB/OK/SW-cl.35/PRO2286)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。
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