保存条件存储:在- 20°C为一年。避免重复冻融循环。冻干抗体稳定在至少一个月室温超过一年保持在20°当用无菌PBS pH 7.4缓冲或稀释的抗体抗体稳定至少两周在2-4°C.
【相关标记有】: Alexa Fluor 350 标记、Alexa Fluor 488 标记、Alexa Fluor 555 标记、Alexa Fluor 647 标记、AP标记、APC标记、Biotin标记、Cy3标记、Cy5标记、Cy5.5标记、Cy7标记、FITC标记、Gold标记、HRP标记、PE标记、PE-Cy3标记、PE-CY5标记、PE-CY5.5标记、PE-CY7标记、RBITC标记.
方法一:我们的抗体(冻干粉)已经包含了0.01M PBS、1% BSA和0.1% 防腐剂(叠氮钠或庆大霉素),您只需要加入的双蒸水就行了。抗体溶解后,置于-20℃保存,好分装后使用,避免反复冻融,可保证至少1年有效;
方法二:也可以只加入一半体积的双蒸水,再用一半体积的甘油补足,置于-20℃保存,这样抗体不会冻,有利于抗体的稳定。
后续试验时,再使用对应的缓冲液稀释成工作液,即用即配。
我们的抗体(冻干粉),在常温放置下,至少一个月有效;若在-20℃下保存(推荐),至少三年有效。
抗体修复方式:
修复液:0.01M 枸橼酸(pH6.0)或者0.05M EDTA(pH8.0)
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方法1:沸水浴修复,将盛有修复液和玻片的烧杯置于沸水浴环境,保持外部沸腾状态15min,自然冷却至室温;
方法2:微波修复,将盛有修复液和玻片的烧杯置于微波炉中,高火5min,停火3min,中火5min,自然冷却至室温。
类标记抗体相关验室指导:脱片的原因可能有以下几点:
(1)切片在脱蜡之前没有进行烤片,一般片子在做之前需烤片。 烤片的目的是将带有蜡的组织切片牢固地黏在载玻片上,以免染色过程中切片脱落。切片在56—60℃的恒温箱中至少放置1小时才能达到此目的,但是,通常的烤片温度为;8~60℃,时间为2—6小时。由于高温干燥可加速组织中抗原的氧化,因此高温烤片对抗原有破坏作用;
(2)在贴片前,载玻片处理的不够干净。处理载玻片的步骤:洗涤剂洗-水洗-过酸-水洗-酒精浸泡-晾干-多聚赖氨酸挂片-晾干备用;
(3)粘片剂涂的太少或是粘片剂配得浓度不够。一般用0.1 mg/ml的多聚赖氨酸进行包被。多聚赖氨酸在水溶液中易分解,所以一次不要配太多工作液。配制多聚赖氨酸溶液使用超纯水(每100mL已稀释的多聚赖氨酸溶液要包被的玻片40-90张, 超过90张片子将影响其黏合力),释过的多聚赖氨酸溶液要放在2-8℃,至少在3个月内是稳定的;
(4)展片:一定要展开,尽量等标本完全展平在往载玻片上贴!而且贴的时候不要有气泡,如果展片不好的话,可以多烤一会。掉片也会有是这个原因,特别是标本面积很小的;
(5)切片时尽量要薄(3-5微米),平展不要有皱折,组织块本身不要太大。脂肪组织和软骨组织本身容易脱片;
(6)如果掉片很多的话,可以考虑ihc过程中的每一步水洗时间尽量缩短(在不影响结果的情况下)。