N4 亚型流感病毒荧光PCR检测试剂盒

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
参数规格：
产品名称：N4 亚型流感病毒荧光PCR检测试剂盒
产品规格：详见说明
产品货号：FS-P64464

产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
产品特点：本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。
运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限一年。
自备试剂
DNA模板、10×ROX（根据机型决定，具体见使用方法）。

产品及特点：
1. 即开即用，用户只需要提供病毒样品。
2. 根据保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量PCR检测，避免后续污染。
5. 本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

使用方法：
一、稀释PCR阳性对照（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）
1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
2. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
8. 如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号（浓度为1×10E4 拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝）或第5号（浓度为1×10E5 拷贝/μL，10μL相当于10万拷贝）再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品，则PC和NC的体积也必须是200μL。
9. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。
三、设置qPCR反应（20 μL体系，在样品制备室进行）
10. 如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复，则反应设置数量相应增加2或3倍。
11. 产品仅用于科研在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后加）

AQP-4 大鼠水通道蛋白4ELISA检测试剂盒  AQP-4 ELISA Kit

INH-A 大鼠抑制素AELISA检测试剂盒  INH-A ELISA Kit

TG 大鼠甲状腺球蛋白ELISA检测试剂盒  TG ELISA Kit

AQP-1 大鼠水通道蛋白1ELISA检测试剂盒  AQP-1 ELISA Kit

AQP-3 大鼠水通道蛋白3ELISA检测试剂盒  AQP-3 ELISA Kit

AQP-5 大鼠水通道蛋白5ELISA检测试剂盒  AQP-5 ELISA Kit

PL-A2 大鼠磷脂酶A2ELISA检测试剂盒  PL-A2 ELISA Kit

HO-1 大鼠血红素氧合酶1ELISA检测试剂盒  HO-1 ELISA Kit

大鼠胃肠癌标志物CA199ELISA试剂盒  Gastric cancer marker ca199 ELISA Kit

大鼠乳腺癌标志物-CA153ELISA试剂盒  Breast cancer marker-ca153 ELISA Kit

N4 亚型流感病毒荧光PCR检测试剂盒stabilin1/STAB 1  **管内皮细胞和管内皮细胞受体1抗体 规格: 0.2mlhnRNP L  异质核糖核蛋白L抗体 规格: 0.2ml

MEP1A/Meprin alpha/PPHA  苯甲酸肽水解抗体 规格: 0.1mlPhospho-PLC γ1 (Tyr783)  磷酸化磷酯Cγ1抗体 规格: 0.1ml

Rabbit anti-MG IgG whole serum  兔抗爪沙鼠IgG抗清 规格: 1mlET-1(2C4)  内皮素-1单克隆抗体 规格: 0.2ml

Factor XI  凝因子11抗体 规格: 0.2mlInsig2  胰岛素诱导基因2抗体 规格: 0.1ml

PTPN4/MEG1  蛋白酪磷酸非受体型4抗体 规格: 0.1mlNOC2L  NOC2家族样蛋白抗体 规格: 0.2ml

p150 CAF1  染色质组装因子1P155抗体 规格: 0.2mlHRPT2/CDC73/Parafibromin  甲状旁功能亢进蛋白2抗体（细胞分裂周期73） 0.2ml

beta-Amyloid(1-16)  β淀粉样肽（1-16）抗体 规格: 0.1mlC3  过敏**C3（补体C3）抗体 规格: 0.1ml

ARSF  芳香基硫酸酯F抗体 规格: 0.2mlTIMP-3  金属蛋白组织抑制因子-3抗体 规格: 0.1ml

TPST2  酪蛋白硫酸转移2抗体 规格: 0.2mlPhospho-NuMA (Ser395)  磷酸化核有丝分裂器NuMA蛋白抗体 规格: 0.1ml

factor VIII(FVIII) human  第八因子相关抗原抗体 规格: 0.1mlMAGEA11  黑色素瘤相关抗原11抗体 0.2ml

TTX(5E7)  素抗体 规格: 1mlCD117/c-kit/SCFR  干细胞生因子受体/细胞表面分化抗原抗体 规格: 0.1ml

NR2C/NMDAR2C  谷受体2C抗体 规格: 0.2mlRNF15  环指蛋白15抗体 规格: 0.2ml

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