实验方法:
一、悬浮细胞的分离方法 组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，可采用低速离心。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。 二、实体组织材料的分离方法 对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法（物理裂解）和消化分离法。其中，机械分散法的特点是简便、快速，但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差，适用于处理纤维成分少的软组织。消化分离法是指把组织剪切成较小团块（或糊状），应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。
细胞简介：
大鼠脊髓神经元细胞分离自脊髓组织；脊髓是细细的管束状的神经结构，位于脊柱的椎管内且被脊椎保护；是源自脑的神经系统延伸部分。神经系统的细胞依靠复杂的联系来处理传递信息。脊髓的主要功能是传送脑与外周之间的神经信息。人和脊椎动物神经系统的一部分，在椎管里面，上端连接延髓，两旁发出成对的神经，分布到四肢、体壁和内脏。脊髓的内部有一个H形(蝴蝶型)灰质区，主要由神经细胞构成；在灰质区周围为白质区，主要由有髓神经纤维组成；脊髓是许多简单反射的。脊髓两旁发出许多成对的神经(称为脊神经)分布到全身皮肤、肌肉和内脏器官。脊髓是周围神经与脑之间的通路，也是许多简单反射活动的低级。按脊神经的出入可把脊髓也分为相应的31节，31对脊神经就是由不同的脊椎发出的。神经系统基本的结构和功能单位是神经元，即神经细胞，其大小和外观在神经系统中差异很大。但都具有胞体和树突、轴突。胞体又叫核周体，内含神经丝、微管、内质网、游离核糖体和一个有明显核仁的核。一些大神经元突起的粗面内质网可用Nissl染色显示，在光镜下是灰蓝色斑块状，称为尼氏小体。树突和轴突是神经元的突起，能在神经元之间传递电冲动，突起的大小和形态各不相同，很难用常规的显微镜鉴别。脊髓组织内含有大量胶质细胞，神经元含量少，分离纯化难度大，且脊髓神经元细胞是高度分化的终末细胞，不能分裂增殖，培养要求高。刚接种的脊髓神经元呈圆形，体积小，透亮，无突起。培养2-3d，可见胞体增大，突起增多延长；培养6-7d，细胞体大饱满，突起明显增加延长并交织成网，光晕明显，立体感强。培养20d后，死亡细胞明显增加，细胞出现内空泡，突起粗细不均，甚至脱壁，发生细胞崩解。
组织来源
产品规格
货号
用途
脊髓组织
5×105cells/T25细胞培养瓶
A01X1703
仅供科研研究实验
培养信息：
包被条件 PLL（0.1mg/ml）
培养基 含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 神经元细胞样
传代特性 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群
消化液 0.25%胰蛋白酶
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
方法简介：
公司实验室分离的大鼠脊髓神经元细胞采用胶原酶&胰酶联合消化法、神经元培养基培养筛选结合化学试剂抑制法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测：
公司实验室分离的大鼠脊髓神经元细胞经β-Tubulin荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、、酵母和等。
公司正在出售的产品：
S100A5ELISAkit
KB抑制蛋白激酶Ζ抗体
IKB zeta
1号染色体开放阅读框145抗体
C1orf145
大鼠前列腺酸性磷酸酶(ACP3)elisa检测试剂盒
DNA损伤彗星中性检测完全试剂盒（荧光染色）
豚鼠γ干扰素(IFN-γ)elisa检测试剂盒
药品糖精（saccharin）含量比色法定量检测试剂盒
中胚层诱导早期反应蛋白3抗体
MIER3
双特异性磷酸酶抗体11抗体
DUSP11
磷酸丙糖异构酶抗体 Anti-Triosephosphate isomerase
环指蛋白41抗体 Anti-RNF41
神经激肽A受体/K物质受体抗体 Anti-NK-2R/Neurokinin A Receptor
上皮型钙粘附分子抗体 Anti-VE Cadherin
Nibp蛋白抗体
TRAPPC9
线粒体核糖体蛋白S17抗体
MRPS17
2，4-二氯苯氧乙酸(除草剂)单克隆抗体 Anti-2,4-D(24D1)
嗅觉受体家族10亚基J3抗体 Anti-OR10J3
鸭甲型肝炎聚蛋白抗体 Anti-duck hepatitis A virus polyprotein
5色氨酸羟化酶2抗体 Anti-TPH2
鸡IgG（HPLC纯化)
大鼠脊髓神经元细胞Chicken IgG
人类疱疹病毒8抗体
E2 25K; E2(25K); HIP-2; Huntingtin interacting protein 2; Huntingtin-interacting protein 2; HYPG; LIG; UBC1; UBE2K; UBE2K_HUMAN; Ubiquitin carrier protein; Ubiquitin conjugating enzyme E2 25 kDa; Ubiquitin conjugating enzyme E2-25 kDa; ubiquitin conjugating enzyme E2K; ubiquitin conjugating enzyme E2K (UBC1 homolog, yeast); Ubiquitin protein ligase; Ubiquitin-conjugating enzyme E2 K; Ubiquitin-conjugating enzyme E2(25K); Ubiquitin-conjugating enzyme E2-25 kDa; Ubiquitin-conjugating enzyme E2-25K; Ubiquitin-protein ligase.
大鼠脊髓微血管内皮细胞
羊卵巢颗粒细胞
Caco-2人结肠腺癌细胞
A549/Tax人肺腺癌紫杉醇耐药性细胞
实验具体步骤：
（1）动物福利：小鼠麻醉牺牲/处死，或者断颈处死；
（2）小鼠：可以将小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者简单粗暴的使用75%乙醇在烧杯中浸泡3min，然后转移至无菌操作台使用无菌吸水纸/棉花将酒精擦拭干净； （3）取出心脏组织：用眼科剪在镊子的配合下打开腹腔，取出心脏组织，置于含有2X双抗冰冷PBS的培养皿中； （4）组织：在含有2X双抗PBS中将心脏一分为二，充分洗涤里边的血液，/3次，每次5min； （5）破碎组织：使用眼科钳或者剪刀，将心脏组织剪碎至1-3 mm3大小组织块；（备注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml胶原酶Ⅰ于37℃联合消化组织3-5 min，
利于后期细胞从组织块中爬出来，同时能够消除部分结缔组织等）
镊子将组织块种植于培养皿中（备注：破碎组织块可能还含有液体，可以在一个无菌培养皿底沾几下，把液体）；种植完成后，可以将培养皿正置3-5小时，然后更换培养皿的 盖子正置放置过夜（也可以使用封口膜密闭培养皿在4℃正置过夜）；
（7）培养基培养：将组织块中轻柔缓慢的加入完全培养基，然后在恒温潮湿细胞培养箱（37℃，5% CO2）培养48h后观察单个细胞从组织块中爬出情况，一般3-5 day能够达到传代的爬出效率；
根据细胞数量种植到对应的培养皿/瓶中；